目的線粒體損傷是膿毒癥介導急性肝損傷的主要機制之一,線粒體膜的轉運功能正常是維持線粒體功能的基本條件。線粒體膜通過調節(jié)離子、水以及脂肪酸等物質轉運,維持線粒體內環(huán)境穩(wěn)定,并調控細胞的合成和代謝功能。本研究探討川芎嗪對膿毒癥致急性肝損傷(SALI)大鼠肝細胞線粒體膜轉運功能的保護作用。方法按隨機數(shù)字表法將SD大鼠分為假手術組、SALI模型組〔采用盲腸結扎穿孔術(CLP)制�！场⒋ㄜ亨褐委熃M(CLP術后經尾靜脈注入鹽酸川芎嗪60mg/kg)和川芎嗪預防組(CLP術前7d,每日經尾靜脈注射鹽酸川芎嗪60mg/kg),每組12只。各組于術后10h取腹主動脈血和肝臟,用酶耦聯(lián)速率法測定血清丙氨酸轉氨酶(ALT)、天冬氨酸轉氨酶(AST)和線粒體型天冬氨酸轉氨酶(m-AST)水平;用比色和化學熒光素法檢測肝細胞三磷酸腺苷(ATP)含量;用磷定量化方法檢測肝細胞線粒體ATP酶活性;用蛋白質免疫印跡試驗(Western Blot)檢測肝細胞線粒體膜水通道蛋白8(AQP8)、肉毒堿棕櫚酰基轉移酶(CPT)的表達。結果1.與假手術組相比,SALI模型組、川芎嗪治療組和川芎嗪預防組血清ALT、AST和m-AST　水平平顯著升高,且川芎嗪預防組較川芎嗪治療組血清AST、m-AST水平降低更為顯著〔AST(U/L):303.9±110.3 比427.0±117.9,m-AST(U/L):168.2±60.0 比239.6±64.9,均P0.05〕;肝細胞ATP含量顯著降低,肝細胞線粒體膜ATP酶活性、AQP8和CPT-1A的表達量明顯下降。2.與SALI模型組相比,川芎嗪治療組和川芎嗪預防組血清ALT、AST和m-AST水平顯著降低〔ALT(U/L):123.8±32.8、105.0±44.5 比233.0±110.1,AST(U/L):427.0±117.9、、303.9±110.3 比 742.6±441.4,m-AST(U/L):239.6±64.9、、168.2±60.0比412.8±252.6,均P0.01〕,肝細胞ATP含量均顯著升高(nmol/mg:29.5±10.3、34.6±11.2比19.3±8.8,均P0.01)。3.線粒體膜ATP酶活性均顯著升高〔以SALI組(100%)為參照,Na+-K+-ATP酶(U/mg):3.91±0.30、、3.97±0.35 比2.87±0.82,Mg2+-ATP酶(U/mg):3.75±0.38、3.88±0.35 比2.64±1.06,Ca2--ATP酶(U/mg):3.15±0.58、、2.98±0.31 比 1.75±1.25,Ca2+-Mg2+-ATP酶(U/mg):3.82±0.31、、3.91±0.42比2.57±1.01,均P0.01〕。4.線粒體膜AQP8和CPT-1A的表達量明顯升高〔以SALI(100%)為參照,AQP8/COX-IV:(79.12±7.79)%、(88.40±9.22)%比(62.08±11.91)%,CPT-1A/COX-IV:(87.92±10.06)%、(84.91±17.48)%比(72.11±7.82)%,均P0.01〕,4組間肝細胞線粒體膜CPT-2表達量差異無統(tǒng)計學意義。結論 1.SD大鼠采用盲腸結扎穿孔術(CLP)可制備膿毒癥模型,并引發(fā)急性肝損傷,致血清致ALT、AST和m-AST7水平升高。2.膿毒癥介導的急性肝損傷發(fā)生時,線粒體膜的Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性,AQP-8、CPT-1A蛋白表達減低及線粒體A TP含量減低。3.川穹嗪對膿毒癥大鼠肝功能的改善功能,對肝細胞線粒體的保護作用,其可能機制是::(1)川芎嗪通過穩(wěn)定線粒體膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性,改善膿毒癥狀態(tài)下線粒體膜對離子的轉運作用,實現(xiàn)對線粒體功能的保護作用。(2)川芎嗪通過上調AQP 8蛋白表達,維持SALI大鼠肝細胞線粒體膜水穩(wěn)態(tài),從而減輕膿毒癥介導的急性肝損傷。(3)CPT-1A可能是SALI的主要損傷靶點,川芎嗪對肝細胞線粒體的保護作用是通過恢復CPT-1A的表達量,促進脂肪酸進入線粒體,保護了脂代謝。
【學位單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R459.7
【部分圖文】：

圖 1 大鼠肝細胞線粒體膜 AQP 8 蛋白表達Fig1 The expression ofAQP 8 in the mitochondrial membrane in rat hepatocytesA：代表性的免疫印跡顯示四組 AQP 8 及 COX-Ⅳ內參表達B：AQP 8 蛋白的相對表達量柱狀圖， n=12，＊:P＜0.01（與對照組比較），#:P＜0.01（與膿毒癥組比較）3.4 線粒體膜 CPT 表達SALI模型組肝細胞線粒體外膜CPT-1A表達量較假手術組明顯降低（P＜0.01）；川芎嗪預防組和治療組線粒體外膜 CPT-1A 表達量較 SALI 模型組明顯升高（均 P＜0.01），見圖 2；而川芎嗪治療組與預防組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。各組間肝細胞線粒體內膜 CPT-2 表達量差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見圖 3。

圖 2 大鼠肝細胞線粒體膜 CPT-1A 的表達Fig2 The expression of CPT-1Ain the mitochondrial membrane in rat hepatocytesC：代表性的免疫印跡顯示四組的 CPT-1A 及 COX-Ⅳ內參表達D：CPT-1A 的相對表達量柱狀圖， n=12，＊:P＜0.01(與對照組比較)，#:P＜0.01(與膿毒癥組比較)

圖 3 大鼠肝細胞線粒體膜 CPT-2 的表達Fig3 The expression of CPT-2 in the mitochondrial membrane in rat hepatocytesE：代表性的免疫印跡顯示 CPT-2 及 COX-Ⅳ內參表達F：CPT-2 的相對表達量柱狀圖，n=124. 討論膿 毒癥是 一種 由細菌和病 毒 等微生物引 起的 全身炎癥反應綜（inflammatory response syndrome，SIRS），在嚴重的情況下會引起膿毒性休多器官功能障礙，因此它是危重癥死亡的主要原因之一。美國每年約有 75 萬者患病，年增長率為 1.5％，到 2020 年每年將有數(shù)百萬新發(fā)嚴重膿毒癥患者到目前為止，臨床上仍未有廣泛用于治療膿毒癥的特效藥物，膿毒癥的高發(fā)
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本文編號：2874369