第一部分銅綠假單胞菌對白色念珠菌的抑制作用觀察目的:分析150株銅綠假單胞菌對白色念珠菌ATCC 90028的體外抑菌現(xiàn)象,探討銅綠假單胞菌產(chǎn)色素情況、菌落形態(tài)及亞胺培南藥敏情況對抑菌現(xiàn)象的影響。方法:1臨床分離的150株銅綠假單胞菌作為研究對象,分別同白色念珠菌ATCC 90028行“十字”劃線法和共孵育實驗,觀察銅綠假單胞菌對白色念珠菌的體外抑菌現(xiàn)象。2觀察受試菌株的產(chǎn)色素情況、菌落形態(tài)、亞胺培南藥敏情況,對比三種因素不同的銅綠假單胞菌對白色念珠菌ATCC 90028抑菌作用的差異,應用行×列表卡方檢驗、Wilcoxon符號秩和檢驗、Fisher確切概率法進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析。結(jié)果:1.“十字”劃線法中,103株銅綠假單胞菌表現(xiàn)出抑制白色念珠菌生長的現(xiàn)象,47株對白色念珠菌生長無影響;共孵育實驗中,150株銅綠假單胞菌均表現(xiàn)出不同程度抑制白色念珠菌生長的現(xiàn)象。150株銅綠假單胞菌中產(chǎn)色素菌株115株,不產(chǎn)色素菌株35株;粘液型菌株11株,非粘液型菌株139株;亞胺培南耐藥菌株30株,亞胺培南敏感菌株120株。2.采用行×列表χ~2檢驗或Fisher確切概率法,分別對銅綠假單胞菌的產(chǎn)色素情況、菌落形態(tài)和亞胺培南藥敏情況與“十字”劃線法結(jié)果進行分析,結(jié)果表明銅綠假單胞菌的產(chǎn)色素情況與“十字”劃線法中對白色念珠菌的抑菌現(xiàn)象有關(guān)聯(lián);不同菌落形態(tài)的銅綠假單胞菌在“十字”劃線法中對白色念珠菌的抑制率有差別;但不同亞胺培南藥敏情況的銅綠假單胞菌在“十字”劃線法中對白色念珠菌的抑制率無差別。3.采用Wilcoxon符號秩和檢驗,分別對銅綠假單胞菌的產(chǎn)色素情況、菌落形態(tài)和亞胺培南藥敏情況與共孵育實驗中孢子數(shù)比值進行分析,結(jié)果表明與不產(chǎn)色素銅綠假單胞菌共孵育的白色念珠菌孢子數(shù)比值高于與產(chǎn)色素銅綠假單胞菌共孵育的白色念珠菌孢子數(shù)比值;與粘液型銅綠假單胞菌共孵育的白色念珠菌孢子數(shù)比值高于與非粘液型銅綠假單胞菌共孵育的白色念珠菌孢子數(shù)比值;但與亞胺培南耐藥或敏感的銅綠假單胞菌共孵育的白色念珠菌孢子數(shù)比值總體分布位置無差別。第二部分銅綠假單胞菌對白色念珠菌的抑制機制探索目的:對銅綠假單胞菌進行同源性分析,并比較phzM和phzS表達水平,探討期間表達水平對銅綠假單胞菌產(chǎn)色素情況及抑菌現(xiàn)象的影響。方法:1將受試菌株按照產(chǎn)色素情況及其對白色念珠菌的抑菌類型分為4組:產(chǎn)色素抑制組、產(chǎn)色素不抑制組、不產(chǎn)色素抑制組、不產(chǎn)色素不抑制組,行脈沖場凝膠電泳(PFGE),結(jié)合組別分析受試菌株同源性。2按組別挑選受試菌株行實時熒光定量PCR(RT-qPCR)檢測綠膿素合成相關(guān)基因phzM和phzS的表達水平,對比分析不同組別受試菌株的phzM和phzS基因表達水平。結(jié)果:PFGE結(jié)果顯示41株受試菌株屬于41種不同帶型,相似系數(shù)在57.5%至90.0%之間,菌株間親緣關(guān)系較遠。RT-q PCR結(jié)果表明8株菌中,phz M表達量產(chǎn)色素菌株是不產(chǎn)色素菌株的105.9%,對白色念珠菌生長抑制的菌株是不抑制菌株的94.4%;phzS表達量產(chǎn)色素菌株是不產(chǎn)色素菌株的97.7%,對白色念珠菌生長抑制的菌株是不抑制菌株的107.3%。結(jié)論:1.產(chǎn)色素的銅綠假單胞菌及非粘液型的銅綠假單胞菌在對白色念珠菌的生長抑制中表現(xiàn)出明顯優(yōu)勢,而銅綠假單胞菌的亞胺培南藥敏情況與白色念珠菌的抑制情況無關(guān)。2.41株受試銅綠假單胞菌同源性均較遠。8株受試菌株phzM和phzS基因的表達量不同組別間無明顯差別。phzM和phzS基因不是唯一調(diào)節(jié)銅綠假單胞菌產(chǎn)生綠膿素的因素,對白色念珠菌的抑制作用并無直接關(guān)系。
【學位單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R446.5
【部分圖文】：

a b圖 1 “十字”劃線法結(jié)果Fig.1 The result of Cross-streaking methoda. No.71 Pseudomonas aeruginosa inhibits the growth of CandidaalbicansATCC 90028b. No.82 Pseudomonas aeruginosa has no effect on Candida albicansATCC 90028

14c d圖 2 共孵育實驗結(jié)果Fig.2 The result of Co-incubation experimentsa, b, c, and d are the states of 20x microscopic spores after co-incubationwith Candida albicans and strains Nos. 15, 71, 82 and 91, respectively.

色素情況的銅綠假單胞菌與白色念珠菌 孵育時孢子數(shù)比值的分布（P=0.014）tribution of Spore Number Ratio of Pigment- Pseudomonas aeruginosa in Co-incubation albicansATCC 90028 (P=0.014)

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本文編號：2819216