【摘要】：【研究背景】腹膜透析是基于腹膜生物性半透膜的特性,高糖腹透液與腹膜毛細(xì)血管內(nèi)血液進(jìn)行物質(zhì)的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn),從而實(shí)現(xiàn)血液凈化的目的。隨著手術(shù)方式和腹膜透析裝置的改進(jìn),導(dǎo)管相關(guān)的感染和非感染并發(fā)癥已顯著下降,這種情況下,腹膜纖維化就成為長(zhǎng)期腹膜透析面臨的最大挑戰(zhàn),腹膜纖維化可引起透析效能下降和超濾衰竭,最終導(dǎo)致腹膜透析失敗,病人需轉(zhuǎn)為其他腎臟替代治療。近些年,研究報(bào)道了大量關(guān)于腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化新的分子和調(diào)控機(jī)制,提示在纖維化的早期可能存在潛在的干預(yù)位點(diǎn),但想實(shí)現(xiàn)臨床上靶向治療還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠。X-盒結(jié)合蛋白1(X-box binding protein,XBP1)是肌醇需要酶1(inositol reruiring enzyme 1,IRE1)下游關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,它通過(guò)與靶基因啟動(dòng)子序列中的X盒結(jié)合,激活靶基因的轉(zhuǎn)錄。IRE1/XBP是未折疊蛋白反應(yīng)/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(unfolded protein response,URP/endoplasmic reticulum stress,ERS)中一條重要的信號(hào)通路。XBP1s在細(xì)胞生長(zhǎng)和分化、蛋白分泌、細(xì)胞凋亡中具有重要的調(diào)控作用。參與了胰島細(xì)胞與唾液腺的分泌、胚胎肝臟的發(fā)育以及淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)分化。文獻(xiàn)報(bào)道,XBP1s與多種纖維化疾病的發(fā)生發(fā)展,如支氣管囊性纖維、特發(fā)性肺纖維化、硬皮病、肝臟纖維化等有密切聯(lián)系,XBP1s在人腹膜間皮細(xì)胞(human peritoneal mesothelial,HPMCs)和腹膜纖維化中的作用尚未見(jiàn)報(bào)道。我們課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),XBP1s通過(guò)激活JNK信號(hào)通路,參與介導(dǎo)了炎性因子誘導(dǎo)的HPMCs的炎癥反應(yīng),并且發(fā)現(xiàn)XBP1s抑制劑的使用可以減輕炎癥誘導(dǎo)的腹膜纖維化。但XBP1s在高糖刺激的腹膜間皮細(xì)胞纖維化中的作用及分子機(jī)制如何尚不清楚,需要更進(jìn)一步的研究來(lái)證明�！灸康摹�1.檢測(cè)不同透齡腹膜透析患者腹膜透析流出液細(xì)胞中XBP1s表達(dá)水平與纖維化相關(guān)分子的表達(dá),初步探討XBP1s與腹膜纖維化的相關(guān)性。2.尋找人腹膜間皮細(xì)胞HPMCs在高糖刺激下XBP1s表達(dá)水平與纖維化相關(guān)分子表達(dá)的相關(guān)性。3.通過(guò)過(guò)表達(dá)和敲低XBP1s觀察其對(duì)纖維化相關(guān)分子表達(dá)的影響,從而從細(xì)胞水平驗(yàn)證XBP1s對(duì)腹膜纖維化的調(diào)控作用�！痉椒ā�1.取持續(xù)不臥床腹膜透析(Continuous Ambulatory Peritoneal Dialysis,CAPD)患者夜間留腹透析液分離培養(yǎng)流出液細(xì)胞,通過(guò)qRT-PCR和Western blot技術(shù)分別檢測(cè)XBP1s及上皮細(xì)胞表型標(biāo)志E-cadherin、纖維化標(biāo)志分子α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Fibronectin、TGF-β、CTGF的mRNA及蛋白表達(dá)情況;2.利用120mM葡萄糖刺激人HPMCs,通過(guò)qRT-PCR、Western blot和免疫熒光技術(shù)分別檢測(cè)XBP1s及上皮細(xì)胞表型標(biāo)志E-cadherin、纖維化標(biāo)志分子α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Fibronectin、TGF-β、CTGF的mRNA及蛋白表達(dá)情況;3.利用XBP1s過(guò)表達(dá)和shRNA慢病毒感染人HPMCs,建立過(guò)表達(dá)和干擾細(xì)胞系,再給予高糖刺激,觀察纖維化相關(guān)分子表達(dá)情況;4.利用XBP1s過(guò)表達(dá)和shRNA慢病毒感染CAPD患者腹透液流出細(xì)胞中HPMCs,觀察纖維化相關(guān)分子表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】1.隨著透齡的延長(zhǎng),腹透液流出細(xì)胞的形態(tài)由鋪路石樣向梭形轉(zhuǎn)變的趨勢(shì)。qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,隨著透齡的延長(zhǎng),XBP1s mRNA及蛋白表達(dá)均增加;上皮細(xì)胞表型標(biāo)志E-cadherin表達(dá)降低,而成纖維細(xì)胞表型標(biāo)志α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Fibronectin、TGF-β、CTGF等表達(dá)增加。2.在高糖刺激的HPMCs中,qRT-PCR和Western blot結(jié)果顯示,XBP1s表達(dá)增加,同時(shí)上皮細(xì)胞表型標(biāo)志E-cadherin表達(dá)隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)而降低,而成纖維細(xì)胞表型標(biāo)志α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Fibronectin、TGF-β、CTGF等表達(dá)增加。3.用慢病毒感染方法分別建立了過(guò)表達(dá)和干擾人HPMCs細(xì)胞系,感染效率均能達(dá)到或超過(guò)80%。過(guò)表達(dá)XBP1s可以顯著增強(qiáng)高糖刺激下上皮細(xì)胞表型標(biāo)志E-cadherin表達(dá)的下調(diào),以及成纖維細(xì)胞表型標(biāo)志α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Fibronectin、TGF-β、CTGF等表達(dá)的增加。干擾XBP1s可以顯著抑制高糖刺激下上皮細(xì)胞表型標(biāo)志E-cadherin表達(dá)的下調(diào),以及成纖維細(xì)胞表型標(biāo)志α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ、Fibronectin、TGF-β、CTGF等表達(dá)的增加。4.用慢病毒感染方法分別建立了過(guò)表達(dá)和干擾人原代腹膜間皮細(xì)胞(CAPD患者腹透液流出細(xì)胞分離培養(yǎng)所得),感染效率均能達(dá)到或超過(guò)80%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)果3相同。【結(jié)論】隨著透齡的延長(zhǎng),CAPD患者腹膜間皮細(xì)胞由上皮細(xì)胞向成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變,XBP1s的表達(dá)與這一現(xiàn)象呈顯著正相關(guān);通過(guò)細(xì)胞系和原代人HPMCs過(guò)表達(dá)及敲低XBP1s發(fā)現(xiàn),XBP1s介導(dǎo)高糖刺激的人HPMCs由上皮細(xì)胞向成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變。這些發(fā)現(xiàn)證明XBP1s是腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化的重要分子之一,為未來(lái)治療腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化提供了潛在的治療靶分子。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R459.5
【圖文】：

圖 1-1 腹透流出液細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變（×200）（A）透齡 6 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài)；（B）透齡 12 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài)；（C）透齡 33 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài)；（D）透齡 45 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài).2 腹膜透析流出液細(xì)胞中 XBP1s 表達(dá)以β-actin 為內(nèi)參，qRT-PCR 結(jié)果表明：隨著透齡的延長(zhǎng)，XBP1s 的表達(dá)增加（P<0.01），（圖 1-2 A）。Western blot 結(jié)果同樣顯示隨著透齡的延長(zhǎng)，XBP表達(dá)增加（P<0.05），（圖 1-2 B C）。圖 1-2 腹透流出液細(xì)胞中 XBP1s 表達(dá)情況

圖 1-1 腹透流出液細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變（×200）（A）透齡 6 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài)；（B）透齡 12 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài)；（C）透齡 33 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài)；（D）透齡 45 個(gè)月的腹透流出液細(xì)胞形態(tài)；3.2 腹膜透析流出液細(xì)胞中 XBP1s 表達(dá)以β-actin 為內(nèi)參，qRT-PCR 結(jié)果表明：隨著透齡的延長(zhǎng)，XBP1s 的表達(dá)明顯增加（P<0.01），（圖 1-2 A）。Western blot 結(jié)果同樣顯示隨著透齡的延長(zhǎng)，XBP1s的表達(dá)增加（P<0.05），（圖 1-2 B C）。

圖 2-1 高糖刺激人 HPMCs 中 XBP1s 表達(dá)情況A: 高糖刺激的 HPMCs 中 XBP1s mRNA 表達(dá)情況，*P<0.05，**P<0.01；B: 高糖刺激的HPMCs 中 XBP1s 蛋白表達(dá)情況；3.2 高糖刺激人 HPMCs 中纖維化相關(guān)分子表達(dá)情況通過(guò) qRT-PCR 和 Western blot，檢測(cè)了細(xì)胞纖維化相關(guān)分子，qRT-PCR 結(jié)果提示：上皮細(xì)胞表型標(biāo)志 E-cadherin 表達(dá)隨著刺激時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，而成纖維細(xì)胞標(biāo)志分子α-SMA、Vimentin、Collagen Ⅰ、Fibronectin、TGF-β、CTGF 等表達(dá)增加，如圖 2-2 A 所示。蛋白的表達(dá)變化基本上與 mRNA 變化一致，如圖 2-2B 所示。

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 邵維斌;路萍;夏春英;李忻;荀康;;晚期糖基化終產(chǎn)物對(duì)體外培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞上皮-間葉轉(zhuǎn)化的影響[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2017年32期

2 李志明;何學(xué)紅;趙鋼;;三七總皂苷對(duì)腹膜間皮細(xì)胞表達(dá)MCP-1的影響[J];遼寧中醫(yī)雜志;2012年06期

3 洪富源;孫芳;劉軍;姚建;黃一新;;蛋白激酶C在晚期糖基化終產(chǎn)物促進(jìn)人腹膜間皮細(xì)胞分泌纖維連接蛋白中的作用[J];中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志;2012年04期

4 何勁松;印荻;朱桂松;;川芎嗪對(duì)高糖誘導(dǎo)后人腹膜間皮細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J];中國(guó)生化藥物雜志;2008年06期

5 蔣春明;張苗;孫t$;;葛根素對(duì)體外培養(yǎng)人腹膜間皮細(xì)胞保護(hù)作用的研究[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年03期

6 劉虹,彭佑銘,劉伏友;過(guò)氧化物增生體激活受體-γ激動(dòng)劑抑制腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β_1的表達(dá)[J];腎臟病與透析腎移植雜志;2005年02期

7 殷莉波;趙文秀;尹震宇;王效民;;人腹膜間皮細(xì)胞的改良分離及其鑒定[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年27期

8 李向陽(yáng);汪電雷;;燈盞花素對(duì)腹膜間皮細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的影響分析[J];中國(guó)醫(yī)藥指南;2011年26期

9 錢(qián)敏;何勁松;印荻;朱桂松;;辛伐他汀對(duì)高糖誘導(dǎo)后人腹膜間皮細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J];中國(guó)生化藥物雜志;2009年03期

10 臧燕,侯凡凡,張訓(xùn),楊滿球;表皮生長(zhǎng)因子對(duì)腹膜間皮細(xì)胞增殖的影響[J];中華內(nèi)科雜志;1996年02期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 洪富源;孫芳;劉軍;姚建;;二羰基化合物對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

2 賈海燕;樊怡;馬健飛;張玉俠;馮江敏;王力寧;;高糖對(duì)腹膜間皮細(xì)胞醛糖還原酶活性的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

3 黃一新;;高糖、炎癥因子和黃芪對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞增殖的影響[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2007年

4 姜書(shū)寧;趙久陽(yáng);張怡玲;;干擾素-α對(duì)高糖環(huán)境下腹膜間皮細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

5 劉映虹;劉伏友;彭佑銘;劉虹;李茂玉;張浩;;高濃度葡萄糖對(duì)腹膜間皮細(xì)胞細(xì)胞骨架蛋白的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

6 韓捷;馬健飛;樊怡;賈海燕;馬黎;張玉俠;馮江敏;王力寧;;脂多糖、高糖對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

7 郝世軍;李云生;林華志;王怡倩;王文龍;程勇軍;柯穎杰;戴再友;;銀杏達(dá)莫對(duì)腹膜間皮細(xì)胞活性影響研究[A];2012年浙江省腎臟病學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

8 劉映紅;黃昭;劉伏友;彭佑銘;;胰島素對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞增殖、損傷及凋亡的影響[A];中華醫(yī)院管理學(xué)會(huì)血液凈化中心管理分會(huì)2004年會(huì)論文匯編[C];2004年

9 李龍凱;;核心巖藻糖基化修飾對(duì)高糖誘導(dǎo)的大鼠腹膜間皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的影響[A];中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腎臟疾病專業(yè)委員會(huì)2015年學(xué)術(shù)年會(huì)資料匯編[C];2015年

10 樊怡;馬健飛;李志明;丁紅;張靖華;;蛋白激酶C對(duì)腹膜間皮細(xì)胞己糖激酶活性的特異性調(diào)節(jié)[A];“中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2004年年會(huì)”暨“第二屆全國(guó)中青年腎臟病學(xué)術(shù)會(huì)議”論文匯編[C];2004年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 樊怡;高糖通過(guò)p38MAPK和ERK1/2通路誘導(dǎo)腹膜間皮細(xì)胞己糖激酶表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

2 洪富源;甲基乙二醛、晚期糖基化產(chǎn)物對(duì)人腹膜間皮細(xì)胞生物學(xué)作用的體外研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

3 李志明;核因子κB信號(hào)途徑調(diào)控腹膜間皮細(xì)胞表達(dá)MCP-1的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2007年

4 張露;黃芪甲苷干預(yù)腹膜間皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的分子機(jī)制研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

5 房艷輝;低密度脂蛋白對(duì)高糖背景下人腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化和細(xì)胞外基質(zhì)蓄積的影響及其機(jī)制探討[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

6 彭翔;PI3K/Akt信號(hào)通路在腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2010年

7 張柯;miRNA589在TGF-β_1誘導(dǎo)人腹膜間皮細(xì)胞上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)分化的作用及分子機(jī)制[D];中南大學(xué);2010年

8 周循;microRNA-129-5p在人腹膜間皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化中的作用及分子機(jī)制[D];中南大學(xué);2010年

9 李勰家;慢病毒介導(dǎo)的miRNA-302c對(duì)腹膜間皮細(xì)胞EMT的干預(yù)作用及機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

10 董U

本文編號(hào)：2796528