【摘要】：【目的】采用多重置換擴增建立一種可靠、準確的植入前遺傳學診斷方法,應(yīng)用于X-連鎖嚴重聯(lián)合免疫缺陷病(X-SCID)的植入前遺傳學診斷(PGD)�！痉椒ā窟x擇5個位于致病基因IL-2受體γ鏈(IL2RG)基因兩側(cè)的短串聯(lián)重復序列(STR)位點對X-SCID家系進行單體型分析,采用多重置換擴增(MDA)對單細胞進行全基因組擴增,對擴增產(chǎn)物采用在家系分析中具有多態(tài)性的STR位點進行單體型分析,結(jié)合位點Amel進行性別診斷,STR位點均采用單重熒光PCR,同時對IL2RG基因exon5進行測序分析�！窘Y(jié)果】對家系分析中,共有3個STR位點具有多態(tài)性。對10個單淋巴細胞及10個單卵裂球進行了預(yù)實驗:MDA擴增成功率為100%,對致病基因IL2RG exon5的行基因測序的檢測效率為100%;對于3個有多態(tài)性的STR位點和AMEL,PCR擴增效率為96.3%(77/80),等位基因脫扣率(ADO)為11.5%(7/61)。對該家系進行了一個周期的PGD,對7個胚胎進行了診斷,其中2個為正常胚胎,移植后獲得雙胎妊娠,早產(chǎn)活產(chǎn)一個健康男嬰及一個健康女嬰�！窘Y(jié)論】采用多重置換擴增結(jié)合致病基因特異性擴增測序檢測及單體型分析在單細胞水平對X-連鎖嚴重聯(lián)合免疫缺陷病進行檢測,兩者相結(jié)合可避免污染、等位基因脫扣等導致的誤診,提高了PGD診斷效率。
【圖文】：

MgCl2，0.2mmol/LdNTP，正反向引物各0.2μmol/L，3μL的1/100稀釋的MDA產(chǎn)物或外周血DNA，1UinthesinglecelllevelofX-linkedseverecombinedimmunodeficiencydiseasewereperformed.TheprotocolcanavoidmisdiagnosiscausedbycontaminationandADO,andimprovethediagnosticefficiencyofPGD.Keywords:X-linkedseverecombinedimmunodeficiency;preimplantationgeneticdiagnosis(PGD);multipledisplacementamplification(MDA);shorttandemrepeat(STR);haplotypeanalysis［JSUNYatsenUniv（MedSci），2017，38（6）：956-960］圖1X-SCID家系系譜圖Fig.1PedigreeanalysisfortheX-SCIDfamilyI∶1I∶2II∶1II∶2II∶3II∶4III∶4III∶2III∶3III∶1956

引物序列Table1PrimersequencesusedforanalysisLocusDXS339DXS106DXS453DXS227DXS991AMELIL2RGexon5Forward（5’-3’）FAM-ATGAAATAGCCCAGTACTCCFAM-CCTGTACTCCTAGGTATTTGTFAM-GCCCCTACCTTGGCTAGTTAFAM-GTCAGAATAGAAGGCTCCACCFAM-TAGCTAAAAATGTATGAGTAFAM-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTGAGTAGCACAGATGACACTGGTGGBackward（5’-3’）TCTGCTATAACCACACCATCAGAGAGCCAAATCAAGAATGCAACCTCAGCTTATACCCAAGCCTACCTCCTCAGTGCCTCTTAATAGTGTTTTCCTAAGGGATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTGTAGAAAGGCTGGGGTGTTGG圖2X-連鎖嚴重聯(lián)合免疫缺陷病家系單體型分析Fig.2HaplotypeanalysisfortheX-SCIDfamilyDXS10686DXS453173DXS991280102108177163280284DXS106102DXS453177DXS991280maternalaffectedhaplotypematernalnormalhaplotypepaternalnormalhaplotype吳海濤，等.X-連鎖嚴重聯(lián)合免疫缺陷病的植入前遺傳學診斷957

。3討論X-連鎖嚴重聯(lián)合免疫缺陷病的致病基因IL2RG定位于X染色體q13.1，含有8個外顯子，全長4145個堿基對。目前國際上已經(jīng)報道了264種IL2RG突變引起的SCID［13-14］。本例患兒的IL2RG突變位于第5個外顯子處，736位堿基G突變?yōu)門，此種突變類型國內(nèi)已有報道［15］。該病例女方被證實為攜帶者，男方為正常，女方的姐姐也是攜帶者。由于X-SCID是X-連鎖隱性遺傳性疾病，若女方為攜帶者，其生育的女性子代中一半為攜帶者一半為正常，生育的男性子代中一半為患者一半為正常。既往采用性別診斷行PGD，往往選擇圖3IL2RGexon5測序圖Fig.3SequencingpictureofIL2RGexon5A：Farther（normal：G）B：Mother（carrier：GandT）C：proband（affected：T）ET：embryotransfer表2臨床植入前遺傳學診斷結(jié)果Table2ClinicalPGDresultsSiteDSX106DSX453DSX991AMEIIL2RGDiagnosiscarrierOutcomeE186102173177280280102G/TcarrierE2108163284102108GnormalETE3102177280102108TaffectedE486102173177280280102G/TcarrierE586102ADO177280280102108G/TcarrierE686108173ADOADO284102GnormalETE786102173177280280102108G/Tcarrier958

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本文編號：2764561