【摘要】：膠質(zhì)瘤是起源于中樞神經(jīng)膠質(zhì)細胞的惡性腫瘤,是顱內(nèi)最常見的原發(fā)性腫瘤。手術(shù)聯(lián)合術(shù)后同步放化療是目前膠質(zhì)瘤治療的標準方案,放射治療能夠提高膠質(zhì)瘤的治愈率、中位生存時間、無進展生存期及總生存期。近年來隨著放射治療技術(shù)的進展和放射生物學(xué)的深入研究,放射治療已成為膠質(zhì)瘤治療的重要手段之一。基于膠質(zhì)瘤組織學(xué)類型、組織學(xué)分級的差異,其放射治療效果不盡相同。例如,放射治療對不同類型膠質(zhì)瘤的致死效應(yīng)差異顯著,尤其III-IV級星形細胞膠質(zhì)瘤,單純放射治療敏感性差、療效欠佳,通常以同級別或更高級別的形式復(fù)發(fā)。研究表明膠質(zhì)瘤內(nèi)存在低氧分壓的微環(huán)境,而低氧微環(huán)境是膠質(zhì)瘤對放射治療及化療藥物產(chǎn)生拮抗的重要因素。高壓氧是改變腫瘤組織乏氧狀態(tài)的有效手段,其能夠增加血液中的氧濃度,增大氧在組織中的彌散半徑,從而改善腫瘤組織的乏氧微環(huán)境。因此,本研究設(shè)想是否能通過高壓氧改善腫瘤組織乏氧狀態(tài),以提高膠質(zhì)瘤放射敏感性,從而改善膠質(zhì)瘤患者預(yù)后,擬通過本實驗進行驗證。目的:觀察高壓氧聯(lián)合X線照射對人腦膠質(zhì)瘤U251細胞增值活性、細胞周期分布及細胞凋亡的影響,從而探討高壓氧在提高膠質(zhì)瘤細胞放射敏感性中的價值。方法:人腦膠質(zhì)瘤U251細胞株經(jīng)傳代培養(yǎng)后隨機分為對照組、高壓氧組、不同劑量X線照射組(0、2、4、6、8Gy)、高壓氧+不同劑量X線照射組(0、2、4、6、8Gy),觀察各組間細胞形態(tài)、細胞增殖活性、細胞周期分布及細胞凋亡的差異:(1)觀察不同處理組細胞貼壁情況和細胞狀態(tài);(2)克隆形成實驗觀察各處理組細胞存活情況,通過線性二次方程擬合細胞存活曲線,并利用單擊多靶模型計算放射生物學(xué)參數(shù)(D0、Dq、SER),以評價高壓氧對膠質(zhì)瘤U251細胞放射敏感性的影響;(3)CCK-8法檢測高壓氧和不同劑量X線照射對膠質(zhì)瘤U251細胞增殖能力的影響;(4)流式細胞儀(FCM法)分析高壓氧聯(lián)合X線照射處理對膠質(zhì)瘤U251細胞周期分布、細胞凋亡的影響。結(jié)果:(1)細胞培養(yǎng)24h、48h、72h后細胞計數(shù)在高壓氧+X線照射組[(1.04±0.13)×10~6、(0.36±0.06)×10~6、(0.08±0.04)×10~6]顯著低于單純X線照射組[(1.94±0.09)×10~6、(0.79±0.09)×10~6、(0.43±0.10)×10~6](P0.05);(2)單純X線照射(0、2、4、6、8Gy)組U251膠質(zhì)瘤細胞存活分數(shù)(SF)分別為1.000±0.000、0.660±0.021、0.424±0.040、0.301±0.047及0.075±0.010,而高壓氧+X線照射(0、2、4、6、8Gy)組U251膠質(zhì)瘤細胞存活分數(shù)(SF)分別為0.750±0.023、0.319±0.025、0.235±0.020、0.109±0.025和0.019±0.015,高壓氧聯(lián)合不同劑量X線照射組細胞存活分數(shù)顯著低于單純不同劑量X線照射組(P0.05);X線照射組、“高壓氧+X線照射組”的D_0、SF2分別為4.01、2.64和0.660、0.319,“高壓氧+X線照射組”增敏比為SER(D_0)1.52、SER(Dq)2.02,提示高壓氧能明顯增強膠質(zhì)瘤U251細胞的放射敏感性;(3)單純X線照射(2、4、6、8Gy)組U251膠質(zhì)瘤細胞增值抑制率分別為0.1026、0.1530、0.2157和0.2327,高壓氧+X線照射(2、4、6、8Gy)組U251膠質(zhì)瘤細胞增值抑制率分別為0.2039、0.2622、0.3143和0.3360,兩組間比較有顯著性差異(P0.05);(4)G2/M期細胞百分率在高壓氧組(22.36±0.91)、高壓氧+X線照射組(26.70±2.46)均顯著高于對照組(11.56±2.01)(P0.05),而單純X線照射組與對照組間G2/M期細胞百分率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);且G2/M期細胞百分率在高壓氧+X線照射組顯著高于X線照射組(P0.05),而高壓氧+X線照射組與高壓氧組間G2/M期細胞百分率無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05);(5)X線照射組、高壓氧組、高壓氧+X線照射組及對照組的U251膠質(zhì)瘤細胞凋亡率分別為11.62、11.22、30.99和5.59,高壓氧+X線照射組的細胞凋亡率均明顯高于單純X線照射組、單純高壓氧組及對照組。結(jié)論:(1)高壓氧可使膠質(zhì)瘤U251細胞活性降低并抑制其增殖;高壓氧聯(lián)合X線照射可提高放射線對膠質(zhì)瘤U251細胞增殖的抑制率和細胞凋亡率,從而起到放射增敏的作用;(2)高壓氧通過誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤U251細胞周期阻滯于G2/M期,而G2/M期細胞對放射線高度敏感,從而闡明了高壓氧提高放射敏感性的初步機制。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.41;R730.44
【圖文】：

A B圖 3.1.1 膠質(zhì)瘤 U251 細胞培養(yǎng)(A:膠質(zhì)瘤 U251 細胞(×20)；B:膠質(zhì)瘤 U251 細胞(×100)Figure 3.1.1 Glioma U251 cell culture(A:glioma U251 cells (×20); B:glioma U251 cells (×1003.2 膠質(zhì)瘤 U251 細胞系不同條件培養(yǎng)后貼壁細胞計數(shù)

2細胞計數(shù)統(tǒng)計圖

124、48、72h后不同處理組細胞狀態(tài)Figure3.2.1Cellstateindifferenttreatmentgroupsafter24、48、72hours72h

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本文編號：2757153