【摘要】：研究背景:膿毒癥是全身炎癥性疾病,可導致心功能不全,死亡率高。巨噬細胞是重要的炎癥細胞,在膿毒癥中發(fā)揮重要的作用。誘導型一氧化氮合酶(iNOS)在激活的巨噬細胞中高度表達,與炎癥和氧化應激密切相關。傳統(tǒng)的觀念認為炎癥和氧化應激可激活血紅素加氧酶-1(HO-1),催化血紅素產生的代謝產物具有抗炎和抗氧化應激作用。但是,另有研究提示巨噬細胞HO-1具有促炎作用。至于巨噬細胞HO-1在膿毒癥心功能不全中的作用未見報道。通過應用腹腔注射脂多糖(LPS)誘導小鼠膿毒癥心功能不全模型,我們的前期研究發(fā)現(xiàn)LPS顯著激活心臟中浸潤的巨噬細胞HO-1的表達,離體實驗中HO-1基因沉默可顯著下調LPS誘導的巨噬細胞iNOS蛋白的表達水平。因此,我們提出科學假設:巨噬細胞來源的HO-1可以促進膿毒癥心功能不全的發(fā)生。本研究旨在闡明巨噬細胞來源的HO-1在膿毒癥心功能不全中的作用及其機制,為臨床尋找新的作用靶點提供科學依據(jù)。研究方法:應用髓系特異性HO-1敲除小鼠,構建LPS誘導的膿毒癥心功能不全模型,采用心臟超聲、免疫熒光染色、western blot及定量PCR等方法,觀察髓系HO-1敲除對LPS誘導的小鼠膿毒癥心功能不全及生存率的影響;應用HO-1基因沉默技術或其抑制劑,采用western blot、定量PCR及激光共聚焦等方法,觀察LPS誘導的巨噬細胞中HO-1對iNOS調控的影響;應用質粒構建、質粒轉染、免疫共沉淀(Co-IP)等技術,培養(yǎng)過表達質粒的HEK293T及RAW264.7細胞,探討HO-1對iNOS蛋白調控的分子機制。研究結果:髓系HO-1敲除顯著改善了 LPS誘導的膿毒癥心功能不全,并顯著降低死亡率。與此同時,髓系HO-1敲除顯著降低了膿毒癥小鼠心臟中心肌細胞凋亡、浸潤的巨噬細胞過氧亞硝酸鹽生成和iNOS的蛋白表達,但對活性氧(ROS)生成無影響,iNOS的mRNA水平無顯著改變。我們進一步的研究發(fā)現(xiàn)抑制巨噬細胞HO-1的表達可促進iNOS蛋白的溶酶體降解而非蛋白酶體降解,且巨噬細胞HO-1調控iNOS蛋白表達不依賴于其代謝物亞鐵離子,一氧化碳和膽紅素。應用巴弗洛霉素A1抑制iNOS溶酶體降解,顯著阻礙了髓系HO-1敲除對小鼠膿毒癥心功能不全的保護作用。應用Co-IP等技術,證實了 HO-1與iNOS的黃素單核苷酸(FMN)結構域相互結合,從而進一步阻止巨噬細胞中iNOS與微管相關蛋白1輕鏈3(LC3)的結合以及隨后在溶酶體中的降解的分子機制。結論:研究結果表明巨噬細胞來源的HO-1具有促小鼠膿毒癥心功能不全的作用,是通過抑制iNOS的溶酶體降解的機制,并進一步闡明了 HO-1對iNOS溶酶體降解作用的分子機制。
【圖文】：

４．１膿毒癥誘導心功能減退逡逑ＬＰＳ腹腔注射野生型（ＷＴ）小鼠后１２小時用超聲心動圖檢測心功能，我們發(fā)逡逑現(xiàn)，與對照ＰＢＳ組比較，ＬＰＳ組心功能顯著降低（圖１Ａ－Ｂ），并且小鼠生存率顯著逡逑降低（圖１Ｃ）。逡逑Ａ邐Ｂ邐Ｃ邋ｉｃｏｎ邐；邐＝ｒｓｒ逡逑１０0１邐－邐６０ｊ邐－邐＿８０－邐１邐—ＬＰＳ逡逑ｉ邋．．．逡逑ＰＢＳ邐ＬＰＳ邐ＰＢＳ邋ＬＰＳ邐ＰＢＳ邋ＬＰＳ邐Ｗ８邋２－４邋３－０．３Ｗ２４＇８邋５＾ｂ逡逑ｈｏｕｒｓ逡逑圖１膿毒癥誘導心功能減退。Ａ和Ｂ，腹腔注射ＰＢＳ或ＬＰＳ后１２小時的ＷＴ小逡逑鼠的超聲心動圖，射血分數(shù)（ＥＦ）和短軸縮短率（ＦＳ）（每組ｎ＝邋８）；邋Ｃ，腹腔注逡逑射ＰＢＳ或ＬＰＳ的ＷＴ小鼠的存活率（ＰＢＳ組ｎ邋＝邋８，邋ＬＰＳ組ｎ＝１２）；…尸＜０．００１。逡逑４．２膿毒癥心臟ＨＯ－１表徸激活逡逑為了評估ＨＯ－１在膿毒癥心功能不全中的作用，，我們進一步檢測了心臟組織中逡逑Ｈ０－１的水平。ＷＴ小鼠暴露于腹腔注射ＬＰＳ或等體積的ＰＢＳ，注射后１２小時收集心逡逑臟組織標本，比較了邋ＬＰＳ和ＰＢＳ兩組心臟組織中Ｈ０－１蛋白表達水平和巨噬細胞浸潤逡逑水平。Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測和免疫熒光染色顯示，在ＬＰＳ誘導心臟中ＨＯ－１蛋白表達和逡逑巨噬細胞浸潤數(shù)目均顯著增加（圖２Ａ－Ｂ）。值得注意的是

Ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔ檢測和免疫熒光染色顯示，在ＬＰＳ誘導心臟中ＨＯ－１蛋白表達和逡逑巨噬細胞浸潤數(shù)目均顯著增加（圖２Ａ－Ｂ）。值得注意的是，Ｈ０－１在炎性巨噬細胞逡逑中表達尤其明顯而非心肌細胞（圖２Ｂ，圖３Ａ）。以上數(shù)據(jù)提示巨噬細胞ＨＯ－１參與逡逑ＬＰＳ誘導的膿毒癥心功能不全。逡逑３５逡逑
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R459.7

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 吳鵬;田孝祥;劉丹;齊艷萍;閆承慧;韓雅玲;;溶酶體在巨噬細胞極化中的作用研究[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2018年06期

2 康文;王龍;王f^;;M2型巨噬細胞在膿毒癥心功能不全中的功能與調控[J];醫(yī)學綜述;2018年17期

3 鄧嘉成;;細胞內源性溶酶體脂質裂解被巨噬細胞替代性激活所必需[J];生理科學進展;2014年05期

4 AthlinL;張延齡;;巨噬細胞功能和外科[J];國外醫(yī)學.創(chuàng)傷與外科基本問題分冊;1991年04期

5 黃小茹,胡媛芳;巨噬細胞在腫瘤內浸潤的意義[J];癌癥;1985年02期

6 應國華;雷建章;黃善生;凌亦凌;趙玉珍;張玉英;;肺巨噬細胞在某些實驗病理情況下的超微結構變化[J];河北醫(yī)學院學報;1985年04期

7 祁保民;羅先;;多形核白細胞與巨噬細胞的超微結構及抗感染作用(續(xù))[J];福建畜牧獸醫(yī);2007年02期

8 朱友生,唐神結;巨噬細胞在抗結核免疫中的作用及其研究進展[J];中國防癆雜志;2004年03期

9 孫逸平;;結核病灶中巨噬細胞的激活作用[J];國外醫(yī)學參考資料(兒科學分冊);1976年04期

10 巢汝;黃靚;屈順林;張弛;;巨噬細胞能量代謝與動脈粥樣硬化[J];生命的化學;2018年03期

相關會議論文 前10條

1 姚芳苡;黃自坤;傅穎媛;;人巨噬細胞極化相關長鏈非編碼RNA表達譜篩選及研究[A];第十二屆全國免疫學學術大會摘要匯編[C];2017年

2 李枋;霏李杰;;扶正解毒方對共培養(yǎng)體系下腫瘤相關巨噬細胞表型變化影響的實驗研究[A];第一屆青年中西醫(yī)結合腫瘤學術論壇論文集[C];2015年

3 白力;張文蘭;竇晶莉;王永福;;組蛋白修飾與巨噬細胞極化的關系[A];第十屆全國免疫學學術大會匯編[C];2015年

4 史玉玲;王又明;豐美福;;巨噬細胞激活作用的研究[A];中國細胞生物學學會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

5 李小鵬;張倫理;;巨噬細胞極化現(xiàn)象與結核病的關系[A];中華醫(yī)學會2014全國微生物學與免疫學學術年會論文匯編[C];2014年

6 陳羅泉;萬曉朋;韓泉;王青青;;白細胞介素27在巨噬細胞抗病毒天然免疫應答中的作用研究[A];浙江省免疫學會第十次學術大會論文集[C];2016年

7 馬曉媛;田李星;靳賀;梁華平;;創(chuàng)傷/燒傷后單核—巨噬細胞變化及調節(jié)措施研究進展[A];2015第十一屆全國中西醫(yī)結合災害醫(yī)學大會、江蘇省中西醫(yī)結合學會第二屆災害醫(yī)學學術會議、中華衛(wèi)生應急電子雜志第二屆編委會會議暨2015江蘇國際醫(yī)療器械科技博覽會學術論文集[C];2015年

8 馬翠卿;胡光磊;尹曉琳;胡潔;楊建嶺;王秀榮;魏林;;A族鏈球菌誘導巨噬細胞壞死而非凋亡[A];河北省免疫學會第六次免疫學大會資料匯編[C];2010年

9 李奇;王海杰;;透明質酸對于淋巴結巨噬細胞運動的影響[A];解剖學雜志——中國解剖學會2002年年會文摘匯編[C];2002年

10 許樂;孟立;祝宇;;腎癌組織中巨噬細胞極化狀態(tài)的臨床意義研究[A];中國中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會第十四次全國學術會議暨2016年廣東省中西醫(yī)結合學會泌尿外科專業(yè)委員會學術年會論文集[C];2016年

相關重要報紙文章 前10條

1 主持人 王建新;巨噬細胞的多面人生[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2015年

2 通訊員 李靜 記者 胡德榮;惡性腫瘤巨噬細胞未必皆“惡人”[N];健康報;2014年

3 張化;新技術有望延長血小板保存期[N];中國醫(yī)藥報;2003年

4 張化;半乳糖可延長血小板保存期[N];中國醫(yī)藥報;2003年

5 蘭克;以嘗試用巨噬細胞治癱瘓[N];科技日報;2000年

6 記者 房琳琳;“別吃我”! 癌細胞還有第二種方式對巨噬細胞這樣說[N];科技日報;2017年

7 本報記者 張曄 通訊員 蔡心軼 張翰文;肥胖傷肝？原來是巨噬細胞在作怪[N];科技日報;2016年

8 唐穎 倪兵 陳代杰;巨噬細胞泡沫化抑制劑研究快步進行[N];中國醫(yī)藥報;2006年

9 侯嘉 何新鄉(xiāng);硒的神奇功能[N];中國食品質量報;2003年

10 張獻懷;我國創(chuàng)傷膿毒癥研究又有新進展[N];大眾科技報;2003年

相關博士學位論文 前10條

1 賈亮亮;巨噬細胞來源的血紅素加氧酶-1在膿毒癥心功能不全中的作用及其機制[D];浙江大學;2018年

2 范婷婷;TIPE2調控調節(jié)性T細胞胸腺外遷及M2巨噬細胞極化的分子機制研究[D];中國科學院大學(中國科學院深圳先進技術研究院);2018年

3 安冬;巨噬細胞源性泡沫細胞形成與巨噬細胞遷移信號通路的調控機制[D];吉林大學;2018年

4 張曉雨;胞外腺苷二磷酸（ADP）及其受體在類風濕性關節(jié)炎中的調控功能和機制研究[D];華東師范大學;2018年

5 初鳳娜;巨噬細胞亞型在實驗性自身免疫性腦脊髓炎發(fā)病中的作用及其機制研究[D];吉林大學;2018年

6 秦居亮;P2X7介導的巨噬細胞調控在腫瘤微環(huán)境中的功能和機制研究[D];華東師范大學;2018年

7 王建華;復方腸泰誘導結腸癌細胞自噬促進腫瘤相關巨噬細胞極化的機制研究[D];南京醫(yī)科大學;2018年

8 趙陶然;炭疽水腫毒素抑制巨噬細胞功能的分子機制研究[D];軍事科學院;2018年

9 鄭冠琳;巨噬細胞在irisin抗動脈粥樣硬化中的作用及相關機制研究[D];山東大學;2018年

10 關曉峰;細胞-晶體反應中外泌體的miRNAs表達譜分析及其調控巨噬細胞極化的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學;2018年

相關碩士學位論文 前10條

1 馮黎黎;九里香提取物調控巨噬細胞功能改善膿毒癥的機制研究[D];南京大學;2013年

2 郝瑾;探究JNK通路在IL-4誘導的巨噬細胞極化中的作用[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

3 吳玲;皮質酮對LPS誘導鼠巨噬細胞NLRP3表達的抑制作用及機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

4 李依蔓;位于內置網(wǎng)上的蛋白Herpud1調節(jié)IL-4誘導的巨噬細胞極化和遷移[D];重慶醫(yī)科大學;2018年

5 余駿川;體外共培養(yǎng)模型中巨噬細胞對HAP誘導HK-2細胞炎性相關因子表達的調控作用研究[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

6 高弘斐;外周血間充質干細胞對巨噬細胞和Th17/Treg細胞平衡的體外調節(jié)研究[D];遵義醫(yī)學院;2018年

7 劉英光;GPR120受體在巨噬細胞功能調節(jié)中的作用[D];遵義醫(yī)學院;2018年

8 劉芊伊;貓爪草醇類提取物對小鼠骨髓來源巨噬細胞極化的影響[D];遵義醫(yī)學院;2018年

9 王澤帆;Integrins和FNs蛋白在巨噬細胞遷移中的作用[D];陜西師范大學;2018年

10 孟慧杰;結核特異性多肽E7誘導巨噬細胞極化的信號通路的探討[D];廣州醫(yī)科大學;2018年

本文編號：2704486