【摘要】：研究目的:篩選復發(fā)性泌尿系感染(Recurrent Urinary Tract Infection,RUTI)病例,收集并鑒定尿路致病大腸埃希菌(UropathogenicEscherichia coli,UPEC)菌株;分析UPEC菌株的藥物敏感性特征,為臨床治療RUTI提供幫助;分析UPEC菌株的分子流行病學特征和毒力特征,及其在引起RUTI過程中的生物學作用,為后續(xù)探索RUTI的治療和預防方法提供信息。研究方法:1.通過WHONET軟件篩選2011-2015年間解放軍總醫(yī)院收治的RUTI病例;采用VITEK MS對UPEC菌株進行菌種鑒定;使用VITEK藥敏卡分析UPEC菌株對常用抗菌藥物的敏感性。2.使用脈沖場凝膠電泳(Pulsed-field Gel Electrophoresis,PFGE)方法分析 UPEC菌株的同源性特征;使用多重聚合酶鏈反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法鑒定菌株的系統(tǒng)發(fā)生分型;多位點序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)按照網(wǎng)站推薦的方法分析。3.使用多重PCR方法分析UPEC菌株的毒力基因分布;按照相關文獻所述方法分析UPEC菌株的血清抵抗能力、運動能力與趨化能力、生物被膜形成能力以及細胞粘附與侵入能力;UPEC菌株的血清抵抗能力及細胞粘附與侵入能力結果進行菌落計數(shù),運動能力與趨化能力是測定菌落的生長直徑,生物被膜形成能力則測定每株菌株被結晶紫染液染色后的OD值。4.采用SPSS 22.0軟件對所有結果進行統(tǒng)計學差異性分析,P0.05為差異有統(tǒng)計學意義。研究結果:1.經(jīng)篩選、分離、鑒定共收集得到121例RUTI病例,311株UPEC菌株。這些UPEC菌株對10種抗菌藥物的耐藥率大于60%,并且超過75%的UPEC菌株對青霉素類以及喹諾酮類抗菌藥物耐藥;而大部分UPEC菌株對阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦、頭孢替坦以及碳青霉烯類藥物較為敏感。隨著患者年齡增長,所分離的UPEC菌株對頭孢菌素類、單環(huán)內酰胺類、以及硝基呋喃類藥物耐藥率呈下降趨勢。超過70%的產(chǎn)超廣譜 β-內酰胺酶(Extended-Spectrumβ-Lactamases,ESBL)UPEC 菌株對復方磺胺甲VA唑以及四環(huán)素耐藥。住院與門診患者所分離菌株的耐藥情況無明顯差異。2.經(jīng)同源性分析后,將RUTI患者分為兩組:持留感染組(Persistence)59例,共分離到59株UPEC菌株;再感染組(Reinfection)32例,共分離到64株UPEC菌株。其中,再感染組中初次感染組和再次感染組分別為32例。持留感染組UPEC菌株系統(tǒng)發(fā)生型以B2型為主,D型、A型和B1型次之;再感染組UPEC菌株則以A型為主,其次為B2型、D型和B1型,其中,初次感染組的系統(tǒng)發(fā)生型主要為A型,D型次之,再次感染組菌株則以A型為主,其次為D型。持留感染組UPEC菌株的ST型以ST131為主,其次為ST648、ST1193.、ST405。再感染組UPEC菌株的ST型以 ST1193 居多,其次為 ST167、ST405、ST648、ST131。3.持留感染組UPEC菌株所攜帶的毒力因子種類平均為12.3種,而再感染組UPEC菌株為9.5種,兩組有顯著差異(P0.001)。兩組UPEC菌株的血清抵抗能力(P0.001)、細胞粘附能力(P=0.017)及侵入能力(P=0.041)均有顯著差異。兩組UPEC菌株的運動能力(P=0.858)及生物被膜形成能力(P=0.07)沒有顯著差異。結論:1.本文研究收集的UPEC菌株數(shù)量符合統(tǒng)計學分析大樣本要求。在臨床條件允許情況下,RUTI患者可以選擇哌拉西林/他唑巴坦、頭孢派酮/舒巴坦等抗菌藥物作為用藥參考;青霉素類以及喹諾酮類藥物已不適合作為RUTI的經(jīng)驗性治療藥物。頭孢哌酮/舒巴坦、厄他培南可作為治療老年RUTI患者的用藥選擇。2.UPEC菌株的系統(tǒng)發(fā)生型別及MLST型別表明持留感染組UPEC菌株具有更強的毒力,能為后續(xù)UPEC菌株的毒力研究提供參考依據(jù)。3.UPEC菌株毒力特征研究結果表明,持留感染組UPEC菌株攜帶有更多的毒力因子,但對正常人機體血清較為敏感;再感染組RUTI患者初次分離的UPEC菌株與持留感染組UPEC菌株具有相類似的生物學特性。UPEC菌株的運動與趨化能力及生物被膜形成能力可能不是其引起機體泌尿系統(tǒng)持留感染中的關鍵因素。持留感染組UPEC菌株對泌尿道上皮細胞具有更強的粘附與侵入能力可能是其引起機體泌尿系統(tǒng)持留感染的重要前提。
【圖文】：

圖１邋ＰＣＲ產(chǎn)物電泳條帶結果圖逡逑４．３．８統(tǒng)計分析逡逑

１．ＰＦＧＥ同源性分析結果逡逑對１２１例ＲＵＴＩ病例的３１１株ＵＰＥＣ菌株進行脈沖場凝膠電泳，截取部分電泳圖逡逑譜結果如圖２所示，Ｈ９８１２標準菌株經(jīng)酶切后有１６條電泳條帶，與標準結果較為接逡逑近。所有電泳圖譜使用軟件Ｂｉｏｎｕｍｅｒｉｃｓ分析后，將ＵＰＥＣ菌株分為兩組，持留感染逡逑組５９例，，共５９株菌株（圖３）和再感染組３２例，共６４株菌株（圖４）。持留感染組逡逑為經(jīng)ＰＦＧＥ同源性分析后，同一邋ＵＰＥＣ菌株引起的多次ＵＴＩ；再感染組為經(jīng)ＰＦＧＥ同逡逑源性分析后，不同ＵＰＥＣ菌株引起的多次ＵＴＩ。持留感染組選取每例病例首次分離的逡逑ＵＰＥＣ菌株作為后續(xù)研究對象，編號為ＵＲ００１－ＵＲ０５９，Ｇｒｏｕｐｌ。再次感染組每例病逡逑例的兩株ＵＰＥＣ菌株均選取納入作為后續(xù)研究對象，編號為ＵＲ１０１－ＵＲ１６４，邋Ｇｒｏｕｐ２。逡逑１２３４５６７８９邐１０邐１１逡逑ｆｃ—ｉ＂】ｉ－邋ｉｓｉ逡逑圖２邋ＰＦＧＥ電泳圖，第１、６、１１泳道為Ｈ９８１２標準菌株，其他為ＵＰＥＣ菌株。逡逑３３逡逑
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R446.5;R691.3

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