【摘要】：背景與目的:遺傳性溶血性貧血(Hereditary hemolytic anemia,HHA)是由于編碼紅細(xì)胞膜蛋白、紅細(xì)胞酶及血紅蛋白的基因突變引起的一組遺傳異質(zhì)性貧血。先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血(Congenital dyserythropoietic anemia,CDA)是一種罕見(jiàn)的紅細(xì)胞生成異常性疾病,通常表現(xiàn)為溶血性表型,故在HHA的鑒別中應(yīng)加以考慮。對(duì)于常見(jiàn)的單基因突變引起的典型HHA患者可通過(guò)結(jié)合其臨床表現(xiàn)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室的篩查指標(biāo)及陽(yáng)性家族史等得到確診,但是越來(lái)越多的研究顯示部分HHA患者存在多基因多位點(diǎn)突變,同時(shí)還可能存在非遺傳性溶血因素,這些復(fù)合溶血因素的存在易造成漏診或誤診,故對(duì)于復(fù)雜、罕見(jiàn)的HHA患者應(yīng)進(jìn)行基因檢測(cè)以明確致病基因,以便及早地采取治療或預(yù)防措施。本文分兩部分,通過(guò)對(duì)兩例復(fù)雜遺傳性溶血性貧血患者及家系進(jìn)行基因檢測(cè),確定其基因突變位點(diǎn),并分析探討基因突變位點(diǎn)與臨床表型之間的關(guān)系,完善相關(guān)疾病基因突變譜,同時(shí)分析HHA合并非遺傳性疾病時(shí)的臨床特點(diǎn)及診治過(guò)程,以減少HHA漏診和誤診的發(fā)生。第一部分:遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥合并自身免疫性肝炎的研究方法:收集一例遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥(HS)先證者及其父母、祖母的臨床資料,采集血液標(biāo)本后進(jìn)行血細(xì)胞分析、肝功能等常規(guī)項(xiàng)目的檢測(cè),然后對(duì)先證者的血液系統(tǒng)疾病相關(guān)基因全外顯子編碼區(qū)及剪切區(qū)序列進(jìn)行高通量測(cè)序分析,確定其基因突變位點(diǎn),用Sanger測(cè)序法對(duì)該基因突變位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,同時(shí)對(duì)其家系成員進(jìn)行突變位點(diǎn)的檢測(cè)。結(jié)果:血細(xì)胞分析結(jié)果顯示,先證者的紅細(xì)胞(RBC)及血紅蛋白(Hb)正常,平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(MCHC)及網(wǎng)織紅細(xì)胞(RET)比值升高,平均網(wǎng)織紅細(xì)胞體積(MRV)、平均紅細(xì)胞體積(MCV)及平均球形紅細(xì)胞體積(MSCV)降低;其父親的RBC、Hb和MCHC均正常,RET升高,MRV、MCV、MSCV均降低,其母親除MRV輕度降低外余各項(xiàng)參數(shù)均正常;其祖母有輕度貧血,RBC及MCHC正常,MRV、MCV、MSCV也降低;除母親外其他成員均有MSCVMCV,MRV95.77fl。肝功能結(jié)果顯示,先證者的天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)、間接膽紅素(IBIL)及直接膽紅素(DBIL)同時(shí)升高;其父親和祖母的TBIL及IBIL升高;母親的膽紅素結(jié)果正常。此外,先證者免疫球蛋白IgG升高,自身免疫性肝病自身抗體譜檢查示:抗核抗體(IgG型)弱陽(yáng)性,抗平滑肌抗體(ASMA)陽(yáng)性,滴度為1:320,結(jié)合肝穿刺病理檢查結(jié)果診斷為自身免疫性肝炎(AIH)。高通量測(cè)序結(jié)果顯示,先證者發(fā)現(xiàn)兩個(gè)突變位點(diǎn):SPTA1基因2號(hào)外顯子c.134GA(p.R45K)和46號(hào)外顯子c.6544GC(p.D2182H)復(fù)合雜合突變;Sanger測(cè)序驗(yàn)證了先證者的突變位點(diǎn),其母親檢測(cè)出SPTA1基因c.134GA雜合突變,其祖母和父親檢測(cè)出SPTA1基因c.6544GC雜合突變。結(jié)論1.SPTA1基因c.6544GC雜合突變,可能與HS的發(fā)病機(jī)制相關(guān),臨床表型為輕型HS;SPTA1基因c.134GA雜合突變?yōu)榱夹宰儺惖目赡苄源?而c.6544GC和c.134GA復(fù)合雜合突變時(shí)臨床表型也為輕型HS。這兩個(gè)突變位點(diǎn)在國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道,為新突變。2.先證者肝功能異常的原因?yàn)镠S合并AIH所致。第二部分:脫水遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥合并先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血Ⅱ型及自身免疫性溶血性貧血的研究方法:收集一例脫水遺傳性口形紅細(xì)胞增多癥(DHSt)合并先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血(CDA)Ⅱ型的先證者及其父母、哥哥、姐姐和弟弟的臨床資料,采集血液標(biāo)本后進(jìn)行血細(xì)胞分析、肝功能、Coombs試驗(yàn)、G6PD等常規(guī)項(xiàng)目的檢測(cè),同時(shí)行α及β地中海貧血基因檢測(cè),然后對(duì)先證者的血液系統(tǒng)疾病相關(guān)基因全外顯子編碼區(qū)及剪切區(qū)序列進(jìn)行高通量測(cè)序分析,確定其基因突變位點(diǎn),用Sanger測(cè)序法對(duì)該基因突變位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,同時(shí)對(duì)其家系成員進(jìn)行該基因突變位點(diǎn)的檢測(cè)。結(jié)果:血細(xì)胞分析結(jié)果顯示,先證者存在中度貧血,RET、MCV和MCHC均正常;其父親無(wú)貧血,RET比值輕度升高,MCV和MCHC均正常;其母親、哥哥和姐姐的Hb正常,RET正常,RBC升高、MCV降低;其弟弟的Hb正常,MCV降低。肝功能結(jié)果顯示,先證者及其弟弟的TBIL及IBIL均升高,余成員無(wú)異常。Coombs試驗(yàn)結(jié)果顯示,先證者直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT)陽(yáng)性,診斷為自身免疫性溶血(AIHA)。G6PD活性均正常。α及β地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果顯示:先證者和父親的α-及β-珠蛋白基因未檢出突變;其母親和哥哥檢測(cè)到α-珠蛋白基因3.7雜合突變合并β-珠蛋白基因17位點(diǎn)雜合突變,基因型為-α~(3.7)/αα、β~(17)/βN,姐姐檢測(cè)到β-珠蛋白基因17位點(diǎn)雜合突變,弟弟檢測(cè)到α-珠蛋白基因3.7雜合突變。高通量測(cè)序結(jié)果顯示,先證者發(fā)現(xiàn)3個(gè)突變位點(diǎn):PIEZO1基因c.4608_4615del(p.Gly1537Glufs*82)移碼突變、SEC23B基因c.1571CT(p.Ala524Val)和c.2149GT(p.Ala717Ser)復(fù)合雜合突變。Sanger測(cè)序證實(shí)了先證者的上述3個(gè)突變位點(diǎn),先證者的父親檢測(cè)到PIEZO1基因c.4608_4615del及SEC23B基因c.2149GT復(fù)合雜合突變,母親和姐姐檢測(cè)到SEC23B基因c.1571CT雜合突變,哥哥檢測(cè)到SEC23B基因c.2149GT雜合突變,弟弟則檢測(cè)到SEC23B基因c.1571CT和c.2149GT復(fù)合雜合突變。結(jié)論1.PIEZO1基因c.4608_4615del移碼突變時(shí)臨床表型為無(wú)癥狀的DHSt,該基因突變位點(diǎn)在國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道,為新突變。2.SEC23B基因c.1571CT雜合突變,臨床表型為無(wú)癥狀的CDAⅡ型攜帶者,此突變位點(diǎn)已有文獻(xiàn)報(bào)道。SEC23B基因c.2149GT雜合突變臨床表型為無(wú)癥狀的CDAⅡ型攜帶者,此突變位點(diǎn)在國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道,為新突變。SEC23B基因c.1571CT和c.2149GT復(fù)合雜合突變時(shí)可能與CDAⅡ型的發(fā)病機(jī)制相關(guān),臨床表型為輕型CDAⅡ型患者。3.先證者溶血性貧血的原因可能是由DHSt合并CDAⅡ型及AIHA所致,同時(shí)存在遺傳性和獲得性的溶血因素。
【圖文】：

巴細(xì)胞浸潤(rùn)15.11 陰性 7.870↑ 84.73↑ ml） 0.00 陰性 陰性 陰性 血紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果輕度大小不等，以小細(xì)胞為主，部分細(xì)胞占 18%（見(jiàn)圖 1-2）。

祖母在 46 號(hào)外顯子檢測(cè)到 SPTA1 基因 c.6544G>C 雜合錯(cuò)義突變，，在 SPTA1 基因 2 號(hào)外顯子檢測(cè)到 c.134G>A 雜合錯(cuò)義突變，測(cè)序結(jié) 1-7，具體測(cè)序圖見(jiàn)圖 1-3A，1-3B。表 1-7 Sanger 測(cè)序結(jié)果突變位點(diǎn) 先證者 父親 母親 祖母1 chr1:158655028c.134G>A√ - √ -1 chr1:158587833c.6544G>C√ √ - √中“-”表示未檢出突變位點(diǎn)，“√”表示檢出突變位點(diǎn)）
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R556;R440

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本文編號(hào)：2672735