【摘要】：背景:乳腺癌位居女性癌癥發(fā)病之首,且我國居民的乳腺癌發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢,其早期診斷、早期治療是提高患者生存率的關(guān)鍵,因而針對乳腺癌的早期診斷與治療已成為研究熱點。光聲成像技術(shù)具有光學(xué)成像的高對比度和超聲成像的良好組織穿透力,能實時收集包括結(jié)構(gòu)、功能、代謝和分子信息在內(nèi)的多種生理病理數(shù)據(jù),理論上,有利于乳腺癌的早期診斷。同時,隨著分子影像技術(shù)的迅猛發(fā)展,利用各種具有多種功能的光聲造影劑,將光聲成像與治療方法相結(jié)合起來的技術(shù)日益增多,為實現(xiàn)乳腺癌診療一體化研究提供可能。目前常用的光聲造影劑有金納米棒和吲哚菁綠,金納米棒價格昂貴,吲哚菁綠雖是目前唯一被FDA批準(zhǔn)用于臨床的染料分子,但其穩(wěn)定性較差、體內(nèi)清除快。因此,研究新型光聲成像劑對疾病的診療一體化具有重要意義。酞菁鋅(ZnPc)作為第二代光敏劑,具有光穩(wěn)定性好、光熱轉(zhuǎn)化效應(yīng)優(yōu)等優(yōu)勢,多用于光動力學(xué)治療,但應(yīng)用于光聲成像的研究鮮見。因此,本研究以PLGA為基材,通過雙乳化法及碳二亞胺法制備RGD靶向的載光敏劑ZnPc及化療藥物多烯紫杉醇的多功能納米探針,旨在探討其光聲介導(dǎo)下誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡的能力,為乳腺癌的診療一體化擴寬思路。目的:制備載多烯紫杉醇及酞菁鋅同時靶向乳腺癌的多功能分子探針,并研究其體外光聲顯像的特性、體外尋靶及光聲介導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡的能力。方法:采用雙乳化法(O/W/O)及碳二亞胺法制備載多烯紫杉醇及酞菁鋅并連接RGD靶向肽的多功能分子探針。采用透射電鏡觀察探針形態(tài),馬爾文激光電位及粒徑測量儀檢測其粒徑及表面電位;紫外分光光度法及高效液相色譜法分別檢測其多烯紫杉醇及酞菁鋅包封率及載藥量;高效液相色譜法及透析法研究激光輻照下PLGA@ZnPc@DTX納米粒體外釋放DTX的特性;體外光聲顯像觀察不同ZnPc含量的納米粒體外顯影情況;流式細胞儀及激光共聚焦顯微鏡檢測其與RGD連接情況;體外尋靶實驗中,激光共聚焦顯微鏡檢測靶向納米粒組、非靶向納米粒(PLGA@ZnPc@DTX)組對乳腺癌細胞的體外尋靶能力;體外誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡實驗中,流式細胞儀檢測空白納米粒組、單純載藥(PLGA@DTX)納米粒組、非靶向納米粒組、靶向納米粒組、非靶向納米粒+激光輻照組、靶向納米粒+激光輻照組各組的細胞凋亡率,評價納米探針體外光聲下誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡的能力。結(jié)果:成功制備靶向乳腺癌的載多烯紫杉醇及酞菁鋅的多功能分子探針,其平均粒徑為(266.00±65.85)nm,表面電位為(-29.20±6.27)mV;多烯紫杉醇的包封率及載藥量分別為(88.00±0.32)%、(34.92±0.02)μg/mg,酞菁鋅的包封率及載藥量分別為(97.25±0.22)%、(30.87±0.11)μg/mg。HPLC 法測定 PLGA@ZnPc@DTX 納米粒在釋放介質(zhì)中24.0 h后,DTX釋放率約50%,48.0 h后釋放率約68%,72.0 h后釋放率約77%,與無激光輻照的對照組相比,實驗組采用激光輻照后,同樣呈緩慢釋放趨勢,激光輻照并未對藥物的釋放產(chǎn)生明顯影響。體外光聲成像實驗表明,PLGA@ZnPc@DTX納米粒的光聲值波峰出現(xiàn)于700nm時;不同ZnPc含量納米粒光聲信號隨ZnPc含量增加而增強,相對于不含ZnPc納米粒的對照組,表現(xiàn)出明顯的光聲信號。激光共聚焦顯微鏡下觀察到FITC標(biāo)記的呈綠色熒光的RGD靶向肽與呈紅色熒光的DiI標(biāo)記的PLGA@ZnPc@DTX納米粒融合后,呈現(xiàn)黃色熒光,表明RGD靶向肽已成功與其相連。流式細胞儀測得PLGA@ZnPc@DTX納米粒與RGD靶向肽結(jié)合率為89.19%。體外尋靶實驗結(jié)果顯示靶向納米粒組細胞周圍呈紅色熒光的納米粒明顯多于非靶向納米粒組。體外誘導(dǎo)乳腺癌細胞凋亡實驗中,流式細胞儀測定空白納米粒組、單純載藥納米粒組、非靶向納米粒組、靶向納米粒組、非靶向納米粒+激光輻照組、靶向納米粒+激光輻照組的MBA-MD-231細胞凋亡率分別為(7.06±2.64)%、(19.31±4.83)%、(17.41±1.78)%、(26.99±5.53)%、(41.54±3.27)%、(62.87±5.95)%,組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),其中靶向納米粒組凋亡率高于非靶向納米粒組,更易誘導(dǎo)細胞凋亡(P0.05);激光輻照條件下,靶向納米粒組細胞凋亡率均高于其他五組(P0.05)。結(jié)論:成功制備了新型納米探針,其多烯紫杉醇及酞菁鋅包封率高,RGD連接率高,具有理想的粒徑和穩(wěn)定的體外緩釋行為,體外光聲顯像見明顯的光聲信號,具備較好的主動靶向乳腺癌細胞的能力,可實現(xiàn)光聲成像介導(dǎo)下抑制乳腺癌細胞增殖。
【圖文】：

９６０邋ｒｎｎ波長范圍的激光輻照ＰＬＧＡ＠ＺｎＰｃ＠ＤＴＸ時，可見光聲值波峰出現(xiàn)于７００ｎｍ逡逑時，由此選定７００ｎｍ波長作為激光的激發(fā)波長采集二維圖像。不同ＺｎＰｃ含量納米逡逑粒光聲信號隨ＺｎＰｃ含量增加呈明顯梯度增強（圖３），以不含ＺｎＰｃ的納米粒作逡逑為對照組。逡逑１７逡逑
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9;R445.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 張君;彭喬立;張小明;劉剛;;腫瘤光聲成像研究進展[J];中華核醫(yī)學(xué)與分子影像雜志;2017年06期

2 駱三;查正寶;李妍妍;張書海;高艷光;;光聲成像造影劑的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2014年25期

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本文編號：2616974