【摘要】：囊性纖維化(cystic fibrosis,CF)疾病是一種重要的遺傳疾病,目前仍然沒有找到很好的治療方法,基因治療作為一種最根本的治療手段顯得非常重要,但是目前針對CFTR基因的編輯效率非常低下,大大限制了基因治療的發(fā)展。本研究建立了 RNP結(jié)合單鏈Oligo的高效基因編輯系統(tǒng),借助該系統(tǒng)對人的iPS細胞的CFTR基因的主要位點(dF508位點、G542X位點與G551D位點)進行編輯,并對方法進行了優(yōu)化,在不使用慢病毒與篩選標記的情況下,使得基因編輯效率大幅度提高,遠遠高于其他文獻報道(從以前的不到1%提高到20%),這項工作一方面可為CF疾病研究提供更多細胞模型,另一方面為其他研究者提供了一套針對CFTR基因主要位點的高效編輯方法,使得針對該疾病的基因治療發(fā)展變得更為迅速,再者該項研究可以為其他單位點突變引起的遺傳疾病的治療提供一個更為高效的方法。
【圖文】：

染效率檢測逡逑率的高低直接決定著基因編輯的效率，我們對Ｃｅｌｅｔ果進行了檢測，我們首先將５ｕｇ帶有綠色熒光蛋白基Ｃｅｌｅｔｒｉｘ公司的電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)染進入２９３細胞，轉(zhuǎn)染的電轉(zhuǎn)儀轉(zhuǎn)染效率，結(jié)果顯示２９３細胞的轉(zhuǎn)染效率可針對蛋白是否具有較高的轉(zhuǎn)染效率，，我們在人ｉＰＳ細０ｍｓ的條件下將１０ｕｇ紅色熒光蛋白嘗試了電轉(zhuǎn)，培養(yǎng)微鏡下觀察，結(jié)果顯示基本上所有的ｉＰＳ細胞都能顯微鏡進行觀察，結(jié)果顯示所有的細胞內(nèi)具有紅色１００％。綜上所述Ｃｅｌｅｔｒｉｘ公司的電轉(zhuǎn)儀具有很好具有很高的轉(zhuǎn)染效率。逡逑Ａ逡逑

圖２．邋ｓｇＲＮＡ設(shè)計逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋２．邋Ｔｈｅ邋ｄｅｓｉｇｎ邋ｏｆ邋ｓｇＲＮＡ逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士后
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R596.1;R450

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本文編號：2600511