【摘要】：目的:研究前發(fā)現(xiàn),慶大霉素的亞抑制濃度預處理可以抑制大腸桿菌標準菌株的叢動能力,該機制可能與抑制琥珀酸脫氫酶(SDH)表達,延胡索酸產生減少相關,提示慶大霉素在治療大腸桿菌感染有其自身優(yōu)勢。本研究通過對臨床分離菌株及標準菌株分別進行慶大霉素預處理,結合體內外實驗,及熒光實時定量PCR驗證亞抑制濃度慶大霉素可降低細菌毒力及其相關機制。方法:1利用體外實驗驗證慶大霉素對臨床菌株的叢動性抑制作用,用肉湯稀釋法測定臨床菌株的最低抑菌濃度(MIC),進而使用1/2MIC的慶大霉素處理菌株,未經處理的作為對照組,兩組各取2ul菌液接種于叢動(swarm)平板及游動(swim)平板,在室溫下孵育,測量菌落直徑。2通過體內實驗進一步驗證1/2MIC的慶大霉素可以減低細菌毒力。3大腸桿菌的運動性主要靠鞭毛,參與鞭毛運動的基因目前已報道的有motA、motB等,fliA作為二級調控系統(tǒng)亦參與鞭毛合成。通過RT-PCR觀察藥物處理前后fliA的基因表達量間接推斷其與降低毒力機制相關,為后續(xù)探討SDH-延胡索酸-fliA信號通路在慶大霉素抑制大腸桿菌叢動性降低毒力的作用機制提供理論依據。結果:1體外驗證證實,亞抑制濃度的慶大霉素處理后臨床菌株的叢動性明顯抑制。共進行了三次實驗,每次實驗重復三次。2體內試驗,購買20g左右昆明雄性小鼠,按標準菌株ATCC25922和臨床菌株968(分離于尿液標本)分組,其中藥物處理的為實驗組,未經處理的為對照組,進行腹腔注射小鼠,結果發(fā)現(xiàn)每組(n=10)實驗組和對照組注射0.5×10~8 cfu、0.5×10~7 cfu的大腸桿菌后,經1/2MIC慶大霉素預處理后的大腸桿菌毒力明顯下降,小鼠48hr內死亡率10~8 cfu/ml下,標準菌株由100%降至50%,臨床菌株由100%下降至70%;10~7 cfu/ml下,標準菌株由50%降至0%,臨床菌株由30%下降至0%,結果表明,在亞抑制濃度的慶大霉素作用下,大腸桿菌的毒力較前減低。因試驗時間有限,后期可繼續(xù)擴增試驗動物數(shù)量進一步驗證。3 RT-PCR,慶大霉素預處理的為實驗組,慶大霉素與延胡索酸共同處理的也為實驗組,不做處理的為對照組,通過實時熒光定量PCR,得出單用慶大霉素處理的fliA表達量下調,慶大霉素與延胡索酸同時處理的因延胡索酸濃度fliA表達量有所不同,PCR結果為我們提出的假設:慶大霉素抑制SDH轉錄,導致延胡索酸合成減少,延胡索酸作為細胞內信號分子引發(fā)鞭毛相關轉錄因子fliA(σ28)的下調,進而導致下游部分鞭毛基因下調,最終使得大腸桿菌叢動性下降。結論:1亞抑制濃度慶大霉素對大腸桿菌具有抑制其叢動性進而降低毒力的作用。2亞抑制濃度慶大霉素可通過降低細菌鞭毛相關基因表達量進而抑制其運動性。
【圖文】：

68swarm運動

1.3.3 通過實驗得到運動實驗結果圖1-2 ATCC 25922 swarm運動 圖1-3 ATCC 25922 swim運（P＜0.05，具有顯著統(tǒng)計學意義） （P＜0.05，具有顯著統(tǒng)計學意義
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R446.5

【參考文獻】

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1 張海月;康元環(huán);王姣姣;張偉;劉少昆;單曉楓;錢愛東;;大腸桿菌生物被膜與耐藥性的關系[J];中國獸藥雜志;2015年06期

2 王德端;;抗菌藥物后效應與合理用藥[J];中國醫(yī)藥指南;2014年28期

3 曹冬梅;吉文匯;嚴亞賢;王恒安;孫建和;陸承平;;Stx2噬菌體溶原對大腸桿菌運動性及其相關基因表達的影響[J];微生物學報;2014年07期

4 郭志燕;周明旭;段強德;朱國強;;細菌鞭毛的致病性及其免疫學應用的研究進展[J];微生物學報;2014年03期

5 鄭波;呂媛;;衛(wèi)生部全國細菌耐藥監(jiān)測網2011年革蘭陽性菌耐藥監(jiān)測[J];中國臨床藥理學雜志;2012年12期

6 曾縣平;;細菌鞭毛系統(tǒng)的研究進展[J];安徽農業(yè)科學;2012年27期

7 徐引弟;王治方;朱文豪;梁躍;郭成留;;豬腸外致病性大腸桿菌的分離鑒定和藥敏試驗[J];河南農業(yè)科學;2011年01期

8 胡族瓊;陳清;周文;宋燦磊;胡靜;俞守義;;氨基糖苷類抗生素誘導嗜麥芽窄食單胞菌適應性耐藥發(fā)生及其初步機制[J];實用醫(yī)學雜志;2009年16期

9 匡長春,王芳,宋祺;抗生素后效應的表達方法及臨床意義[J];中國藥師;2000年06期

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2 段強德;F18+大腸桿菌鞭毛與其致病相關性的研究[D];揚州大學;2012年

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1 楊玉倩;黏附侵襲性大腸桿菌fliC、fimH基因缺失株的構建及相關功能性分析[D];揚州大學;2018年

2 胡俊強;沙門氏菌FliT-FliD蛋白復合物及大腸桿菌O157:H7 Z0021蛋白結構與功能研究[D];山東大學;2014年

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本文編號：2597345