發(fā)布時間：2020-03-19 08:42

【摘要】：結核病是由結核分枝桿菌引起的一種慢性傳染性疾病。近年來,耐多藥結核(multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)患者以及廣泛性耐藥結核(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)患者案例逐漸增加,其中 XDR-TB患者治療時間更長,治愈難度更大。此外,臨床上結核菌異質性耐藥的情況也越來越多被發(fā)現(xiàn),增加了分子診斷的難度。目前,對于耐藥結核仍然缺少臨床適用的快速、高靈敏的診斷方法。為了實現(xiàn)XDR-TB的早期診斷,有效指導臨床醫(yī)生用藥,本研究基于多色熔解曲線分析技術,建立結核分枝桿菌二線藥物耐藥突變檢測體系,包括氟喹諾酮類藥物耐藥檢測體系以及注射類二線藥物耐藥檢測體系。第一章,緒論。主要介紹結核病概況,結核病臨床診斷技術,結核分枝桿菌異質性耐藥以及多色熔解曲線分析技術。第二章,氟喹諾酮類藥物耐藥突變檢測體系的建立。為了解決對結核分枝桿菌氟喹諾酮類藥物耐藥突變類型識別區(qū)分的問題,以及實現(xiàn)低水平異質性耐藥突變檢測,輔助醫(yī)生早診斷、精確用藥,本研究基于多色熔解曲線分析技術,建立了單重雙色檢測體系,FQ-MMCA體系。體系針對氟喹諾酮類藥物gyrA基因的耐藥決定區(qū)設計探針,實現(xiàn)異質性突變檢測能力達5%-20%突變水平;利用781份臨床分離株對體系的臨床診斷性能進行評價,結果顯示,FQ-MMCA體系的敏感性為92.3%,特異性為97.6%。第三章,注射類二線藥物耐藥檢測體系的建立。基于多色熔解曲線技術,本研究建立單管雙重四色體系,SL-DeepMelt體系,實現(xiàn)對注射類二線藥物耐藥基因rrs基因1401、1402和1484位點以及eis啟動子區(qū)-10、-13、-14以及-37位點設計探針進行檢測。本體系實現(xiàn)對最高突變頻率位點rrs1401 AG異質性檢出能力達1%;本研究利用488份臨床分離株對體系的臨床診斷性能進行評價,結果顯示,SL-DeepMelt體系的敏感性為90.5%,特異性為97.8%。本體系的優(yōu)勢在于單管實現(xiàn)多個位點的檢測,大大降低臨床檢測操作復雜性;同時SL-DeepMelt體系實現(xiàn)低水平異質性耐藥突變檢測,有利于結核分枝桿菌注射類二線藥物耐藥的早期快速診斷。
【圖文】：

是最有效的一線結核藥），，其中出現(xiàn)４９萬耐多藥結核�。ǎ恚酰欤簦椋洌颍酰纾颍澹螅椋螅簦幔睿翦澹裕�，逡逑ＭＤＲ）案例，并且將近一半（４７％）的案例在印度、中國和俄羅斯聯(lián)邦三個國家。逡逑圖１－３所示為２０１６年的新發(fā)耐多藥患者統(tǒng)計圖，由圖可知，中國、印度和俄羅逡逑斯聯(lián)邦國的結核病耐藥情況較為嚴重，總體看來占據(jù)全球的耐多藥患者的逡逑４７％［３］。逡逑截至２０１６年底，全世界１２３個國家報告了廣泛耐藥結核病（ｅｘｔｅｎｓｉｖｅｌｙ邋ｄｒｕｇ－逡逑ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋ＴＢ邋，邋ＸＤＲ－ＴＢ）邋病例。邋所謂的邋ＸＤＲ－ＴＢ，邋即在邋ＭＤＲ－ＴＢ邋的基礎上，對至少一逡逑種氟唾諾酮類以及一種二線注射類藥物耐藥。共９１個國家和５個地區(qū)報告了有逡逑代表性的數(shù)據(jù)，包括連續(xù)監(jiān)測數(shù)據(jù)或關于耐多藥結核病病例中廣泛耐藥結核病逡逑７逡逑

逡逑Ｎｏｔ邋ａｐｐｌｉｃａｂｌｅ逡逑圖１－２：邋２０１６年全球ＴＢ死亡率統(tǒng)計圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－２：邋Ｅｓｔｉｍａｔｅｄ邋ＴＢ邋ｍｏｒｔａｌｉｔｙ邋ｒａｔｅｓ邋ｉｎ邋２０１６．逡逑１．２結核病耐藥情況逡逑結核病是一種很嚴重的全球性疾病，隨著耐藥結核菌以及艾滋病病毒的出逡逑現(xiàn)，結核病控制成為了亟待解決的一大問題。耐藥性是指由于某些原因導致結逡逑核分枝桿菌對原敏感的藥物出現(xiàn)的表型或者遺傳型敏感性下降的現(xiàn)象。根據(jù)逡逑ＷＨＯ結核病報告，２０１６年發(fā)生６０萬耐利福平（ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ）的新發(fā)病例（利福平逡逑是最有效的一線結核藥），其中出現(xiàn)４９萬耐多藥結核病（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ邋ＴＢ，逡逑ＭＤＲ）案例，并且將近一半（４７％）的案例在印度、中國和俄羅斯聯(lián)邦三個國家。逡逑圖１－３所示為２０１６年的新發(fā)耐多藥患者統(tǒng)計圖，由圖可知，中國、印度和俄羅逡逑斯聯(lián)邦國的結核病耐藥情況較為嚴重，總體看來占據(jù)全球的耐多藥患者的逡逑４７％［３］。逡逑截至２０１６年底
【學位授予單位】：廈門大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R446.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王新寧;施旭東;劉根焰;趙旺勝;;酶聯(lián)免疫斑點技術和分枝桿菌改良羅氏固體培養(yǎng)法在肺結核輔助診斷中的價值[J];臨床檢驗雜志;2015年12期

2 孫黎萍;何鑫;;液體MGIT培養(yǎng)法聯(lián)合MPB64膠體金法快速檢測結核分枝桿菌[J];生物技術世界;2015年12期

3 王馨;;結核菌快速培養(yǎng)法與抗酸桿菌涂片在結核病的檢測分析[J];包頭醫(yī)學院學報;2015年08期

4 王馨;;結核菌快速培養(yǎng)法與γ-干擾素釋放試驗在結核病診斷中的應用價值[J];安徽醫(yī)學;2015年05期

5 許宏濤;陳東科;賴惠英;;結核分枝桿菌四種常用方法檢測比較[J];中國熱帶醫(yī)學;2015年05期

6 高建超;柳曉金;齊海亮;謝蘭品;陳顏強;馮建純;鄭立恒;;三種方法檢測腦脊液結核分枝桿菌結果分析[J];現(xiàn)代預防醫(yī)學;2015年05期

7 胡東;楊小康;王婉;邢應如;王文洋;杜昭弘;尤其;章力;陳麗萍;吳靜;張榮波;;pCMV-LC3-Ag85B重組質粒DNA疫苗對結核的免疫保護作用[J];細胞與分子免疫學雜志;2014年11期

8 張俊仙;梁艷;劉銀萍;陽幼榮;王杰;王蘭;吳雪瓊;;應用免疫磁珠分離-改良羅氏培養(yǎng)技術檢測痰結核分枝桿菌的研究[J];中國病原生物學雜志;2014年08期

9 謝兵;;BACTEC MicroMGIT系統(tǒng)在結核菌快速培養(yǎng)中的應用評價[J];社區(qū)醫(yī)學雜志;2014年16期

10 王慧;;3種方法對痰液標本結核分枝桿菌檢測結果的影響[J];臨床合理用藥雜志;2013年07期

相關博士學位論文 前1條

1 樸賢玉;應用單個鎖核酸修飾的探針提高對非互補雜交識別能力的研究[D];中國醫(yī)科大學;2009年

本文編號：2589995