【摘要】：目的探討阿奇霉素耐藥淋球菌菌株的分子流行病學(xué)特征,分析耐阿奇霉素淋球菌的耐藥機(jī)制。方法對36株耐阿奇霉素淋球菌[最小抑菌濃度(MIC)≥1 mg/L]的核糖體23SrRNA、mtrR基因及核糖體蛋白L4/L22基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增測序分析,尋找可能的突變位點(diǎn),比較耐藥基因突變在中度耐藥組(MIC 1~64 mg/L)和高度耐藥組(MIC≥256 mg/L)間的差異。采用NG-MAST對基因序列進(jìn)行分型,獲得阿奇霉素耐藥菌株的基因型別及分布特征。結(jié)果高度耐藥淋球菌菌株核糖體23SrRNA的4個(gè)等位基因均有A2143G的突變,中度耐藥菌株中有3株(8 mg/L≤MIC≤32mg/L)核糖體23SrRNA 4個(gè)等位基因?yàn)镃2599T突變。36株阿奇霉素耐藥菌株中鑒定出28個(gè)不同的序列型別(ST),其中16個(gè)為新發(fā)現(xiàn)的ST,2個(gè)未分型。結(jié)論淋球菌核糖體23SrRNA基因不同位點(diǎn)突變可能與阿奇霉素不同程度的耐藥相關(guān),A2143G突變可能導(dǎo)致高度耐藥,C2599T可能與中度耐藥有關(guān),mtrR基因G45D的突變可能參與阿奇霉素耐藥。通過NG-MAST分型顯示阿奇耐藥菌株的基因型具有多樣性,且覆蓋范圍也較為廣泛;經(jīng)過系統(tǒng)進(jìn)化樹推斷por581基因型有較大可能影響阿奇霉素高度耐藥。
【圖文】：

圖1淋球菌分離株的氨基酸序列與23SrＲNA標(biāo)準(zhǔn)序列比對示例圖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究未檢出mtrＲ編碼區(qū)的雙重位點(diǎn)突變，如A39T/H105Y或G45D/H105Y。2．2基因發(fā)育樹36株阿奇霉素耐藥菌株中鑒定出28個(gè)不同的序列型別(sequencetype，，ST)，其中16個(gè)為新發(fā)現(xiàn)的ST，2個(gè)未分型，ST1866為本地區(qū)阿奇霉素耐藥菌株較為常見的基因型。圖2展示了28個(gè)不同類型的ST之間的進(jìn)化關(guān)系。通過系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，在合肥地區(qū)阿奇耐藥菌株的基因型具有很強(qiáng)的多樣性，且覆蓋的基因范圍比較廣泛。對于發(fā)育樹中的阿奇耐藥菌株根據(jù)其相似性劃分出了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3個(gè)群組。第I組中有7個(gè)不同類型的阿奇耐藥菌株，該組中除了ST13129以外，其他的ST菌株類型均有相同的tbpB33。第Ⅱ組中含有5個(gè)不同類型的阿奇耐藥菌株，其中ST13131與ST13138相似性較高，擁有相同的tbpB566。第Ⅲ組中包含了8個(gè)不同類型的阿奇耐藥菌株，其中除了ST12198與ST12642以外，其余的ST都有相同的tbpB4。該組中2個(gè)高度耐藥的ST12642和ST1055有相同的por581，巧合的是，全國流行的高度耐藥菌株ST1866也有著相同的por581，或許這預(yù)示著por581基因型與阿奇高度耐藥有著一定的內(nèi)部聯(lián)系。另外值得注意的是，在群組Ⅲ中，ST12204、ST13130、ST131363個(gè)類型的菌株具有非常高的相似性，僅有1～2個(gè)堿基對的差異，這在一定程度上印證了阿奇霉素耐藥的穩(wěn)定性。3討論大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的作用機(jī)制是與細(xì)菌核糖體50S亞基的23S核糖體的特殊靶位及某種核糖體的蛋白質(zhì)結(jié)合，阻斷轉(zhuǎn)肽酶作用和干擾mＲNA翻譯，發(fā)揮抑菌作用。目前研究［6］表明，淋球菌對阿奇霉素敏感性下降或耐藥機(jī)制主要涉及藥物作用靶位的改變(如核糖體23SrＲNA基因的特定位點(diǎn)突變)和藥物外排的增加(如mtrＲ基因突變)等，23SrＲNA基因

圖2系統(tǒng)發(fā)育樹突變，而僅有50%阿奇霉素中低度耐藥菌株存在G45D突變，提示該突變可能在阿奇霉素高度耐藥中發(fā)揮較重要的作用。本研究通過對阿奇霉素耐藥菌株進(jìn)行NG-MAST分型顯示，36株阿奇霉素耐藥菌株共具有28個(gè)不同的ST型別，其中16個(gè)為新發(fā)現(xiàn)的型別。另外針對28種不同ST型別的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，合肥地區(qū)阿奇耐藥菌株的基因型不僅具有多樣性，其基因覆蓋范圍也較為廣泛，說明該地區(qū)人群流動性較大。另外本研究顯示，在阿奇霉素耐藥菌株中比較常見的tbpB基因型有tbpB33、tbpB566和tbpB4，提示這3種基因型可能與阿奇霉素耐藥性存在一定聯(lián)系。值得注意的是，本研究顯示多個(gè)阿奇霉素耐藥菌株有相同的por581，其中包括全國流行較廣的ST1866菌株，可以推斷por581基因型有較大可能影響阿奇霉素高度耐藥。目前國內(nèi)阿奇霉素耐藥情況相當(dāng)嚴(yán)重，且高度阿奇霉素耐藥菌株占有較大比例，因此不再提倡把阿奇霉素作為治療淋病及其他一些傳染病的一線藥物。但是對于一些頭孢、青霉素過敏的患者，阿奇霉安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2017Mar;52(3)·363·

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