【摘要】：采用納米金(15 nm)標記神經(jīng)元特異性烯醇化酶抗體(anti-NSE)獲得金標記anti-NSE。在適宜的條件下,金標記anti-NSE可與神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)發(fā)生免疫反應生成NSE的免疫金復合物,使納米金發(fā)生凝集,該液相體系在620 nm處共振光散射信號顯著增強。實驗表明,NSE質量濃度在0.05~20 ng/m L范圍內與共振光散射增強值呈現(xiàn)良好的線性關系,檢出限為0.01 ng/m L,方法已用于人血清中NSE的定量分析。
【圖文】：

的光散射信號改變可建立一種均相免疫檢測NSE的新方法。2.1吸收光譜分別考察了體系的吸收光譜和共振光散射光譜特性。在金標記anti-NSE溶液中加入不同質量濃度的NSE獲得了NSE的免疫金復合物。當NSE質量濃度分別為0，5，10，20ng/mL時，其體系的最大吸收峰分別為521，524，530，537nm，NSE免疫金體系的最大吸收波長隨NSE質量濃度的增加出現(xiàn)了紅移(圖1)。據(jù)研究表明，納米金的吸收峰隨其納米顆粒粒徑的增大紅移［14］，由此可知，在NSE與金標記anti-NSE發(fā)生免疫反應后，納米金發(fā)生了凝集形成了粒徑更大的微粒。圖1NSE免疫金復合物的吸收光譜圖Fig.1AbsorptionspectraofimmunogoldcompoundsforNSE2.2共振光散射光譜膠體金、金標記anti-NSE溶液在620nm處具有共振光散射峰，但散射光信號值很校當anti-NSE和NSE發(fā)生免疫反應后，當未加入PEG時，NSE的免疫金復合物散射光信號僅發(fā)生微弱的增強。當加入高濃度PEG溶液后，NSE的免疫金復合物體系在470nm，620nm處出現(xiàn)了明顯的共振光散射峰，620nm處的散射強度值顯著增強·1199·

逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄逄分析試驗室第36卷(圖2)。據(jù)文獻報道，納米金具有表面等離子共振耦合效應，聚集態(tài)的納米金顆粒相比分散態(tài)的納米金會產生較強的散射光信號［15］。由此可知，在高濃度的PEG作用下，NSE免疫金復合物進一步凝集形成了粒徑更大的微粒。若將聚集納米金顆粒的散射光信號用于NSE檢測，可顯著提高方法的靈敏度，，該體系選擇了在620nm處測定共振光散射強度。圖2NSE免疫金復合物的共振光散射光譜圖Fig.2ＲesonancelightscatteringspectraofimmunogoldcompoundsforNSE2.3實驗條件優(yōu)化2.3.1金標記anti-NSE制備條件優(yōu)化如實驗步驟所述，加入0.1mol/LHCl或0.1mol/LK2CO3溶液調節(jié)膠體金的pH為6.0～10.0。當膠體金的pH在6.0～7.5時，膠體金呈現(xiàn)紫色，納米金發(fā)生了較為明顯的聚集且I620nm較大。當膠體金的pH在8.0～10.0時，金標記anti-NSE能夠在10%KCl溶液的作用下維持酒紅色，且I620nm趨于穩(wěn)定。實驗選擇pH9.0。移取0.50mL膠體金并采用0.1mol/LK2CO3溶液調節(jié)至pH9.0，再分別加入0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0，9.0μgNSE抗體制備金標記anti-NSE。當anti-NSE用量為4.0～9.0μg時，金標記anti-NSE在10%KCl溶液的作用下仍為酒紅色，未發(fā)生明顯的聚集而呈現(xiàn)紫色，且I620nm趨于穩(wěn)定。故選擇在0.50mL膠體金中加入5.0μganti-NSE制備金標記anti-NSE光譜探針，即1.00mL膠體金的NSE抗體用量為10.0μg。2.3.2NSE免疫金復合物生成條件的優(yōu)化考察了檸檬酸-Na2HPO4和KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液對NSE免疫金體系的影響，NSE免疫金反應體系在以上兩種緩沖溶液中均反應較好，但與KH2PO
【作者單位】： 菏澤醫(yī)學專科學校中心實驗室;山東菏澤市立醫(yī)院檢驗科;
【基金】：山東省高等學�？萍加媱濏椖�(J11LB01)資助
【分類號】：O657.3;R446.6

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本文編號：2538460