本文關(guān)鍵詞：用于金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌檢測(cè)的免標(biāo)記型電化學(xué)發(fā)光生物傳感器，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：基于電化學(xué)發(fā)光(ECL)的生物分析方法不僅保留了化學(xué)發(fā)光(CL)分析的諸多優(yōu)勢(shì),還具有可控性強(qiáng)、重現(xiàn)性佳、選擇性好和可進(jìn)行原位檢測(cè)等特點(diǎn)�，F(xiàn)有的ECL生物分析方法多為傳統(tǒng)的探針標(biāo)記模式,其標(biāo)記過(guò)程耗時(shí)耗力,需要投入大量的人力成本和時(shí)間成本,并且在標(biāo)記過(guò)程中往往會(huì)使生物分子(例如抗體和酶)活性喪失,影響其分析效果。而免標(biāo)記型ECL生物傳感器由于避免了探針標(biāo)記,能夠提高ECL分析性能,因此開(kāi)發(fā)一類避免傳統(tǒng)ECL標(biāo)記弊端和不足的免標(biāo)記型ECL生物傳感器分析方法就顯得特別必要。故而,本文主要研究了用于金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌檢測(cè)的兩種免標(biāo)記型ECL生物傳感器:(1)基于免疫球蛋白G和Protein A特異性結(jié)合作用的金黃色葡萄球菌ECL生物傳感器本文利用免疫球蛋白G(Ig G)的Fc片段與金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁中的Protein A(SPA)的特異性結(jié)合作用,建立了一個(gè)用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌的免標(biāo)記型ECL生物傳感器。由于羧基化石墨烯具有較大的比表面積以及良好的電子傳輸能力,本研究將其與IgG進(jìn)行標(biāo)記然后再滴加在玻碳電極表面并用牛血清白蛋白(BSA)進(jìn)行封閉后制成ECL生物傳感器。由于SPA與IgG的Fc段的特異性結(jié)合作用,結(jié)合在生物傳感器上的金黃色葡萄球菌阻礙了ECL界面的電子傳遞以及ECL活性物質(zhì)的擴(kuò)散,結(jié)果導(dǎo)致ECL信號(hào)減小,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)金黃色葡萄球菌的定量分析。所得線性范圍為1.0×103-1.0×109 CFU mL-1,檢測(cè)限為3.1×102 CFU mL-1。當(dāng)使用研制的ECL生物傳感器進(jìn)行金黃色葡萄球菌的檢測(cè)時(shí),整個(gè)測(cè)定在70 min內(nèi)即可完成。食品、環(huán)境樣品和生物樣品的加標(biāo)回收試驗(yàn)顯示本研究的回收率在75%-116.7%之間。該方法特異性好、操作簡(jiǎn)便、制備簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短,為病原菌快速篩查提供了新的途徑。(2)基于銅綠假單胞菌噬菌體特異性識(shí)別作用的銅綠假單胞菌ECL生物傳感器本研究選用銅綠假單胞菌噬菌體(PaP1)特異性識(shí)別銅綠假單胞菌(PA1)的作用,建立了一個(gè)用于檢測(cè)PA1的免標(biāo)記型ECL生物傳感器。由于羧基化石墨烯具有較大的比表面積以及良好的電子傳輸能力,本部分也選用羧基化石墨烯作為PaP1的載體,將其與PaP1進(jìn)行標(biāo)記然后滴加于玻碳電極表面并用BSA進(jìn)行封閉后制成ECL生物傳感器。由于PaP1對(duì)PA1的特異性識(shí)別作用,結(jié)合在ECL生物傳感器表面的PA1阻礙了ECL界面的電子傳遞以及ECL活性物質(zhì)的擴(kuò)散,結(jié)果導(dǎo)致ECL信號(hào)減小,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)PA1的定量分析。所得線性范圍為1.4×102-1.4×106 CFU mL-1,檢測(cè)限為56 CFU mL-1。當(dāng)使用研制的ECL生物傳感器進(jìn)行PA1的檢測(cè)時(shí),整個(gè)測(cè)定在30 min內(nèi)即可完成。食品、藥品和生物樣品的加標(biāo)回收試驗(yàn)顯示本研究的回收率在78.6%-114.3%之間。本工作所制備的ECL生物傳感器不需要繁瑣的操作過(guò)程以及大型的研究所用儀器,操作簡(jiǎn)單、成本低廉、檢測(cè)時(shí)間短,具備較高的靈敏度和特異性,顯示出了較大的應(yīng)用前景。
【關(guān)鍵詞】：電化學(xué)發(fā)光生物傳感器 免標(biāo)記 羧基化石墨烯 免疫球蛋白G 金黃色葡萄球菌 銅綠假單胞菌 銅綠假單胞菌噬菌體
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R446.5;TP212
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-10
• 主要縮寫(xiě)符號(hào)對(duì)照表10-11
• 第1章 緒論11-35
• 1.1 電化學(xué)發(fā)光分析11-13
• 1.1.1 電化學(xué)發(fā)光概述11-12
• 1.1.2 電化學(xué)發(fā)光的主要體系和基本原理12-13
• 1.2 納米材料在電化學(xué)發(fā)光分析中的應(yīng)用13-22
• 1.2.1 石墨烯13-16
• 1.2.2 納米金16-18
• 1.2.3 量子點(diǎn)18-19
• 1.2.4 碳納米管19-20
• 1.2.5 二氧化硅納米粒子20-22
• 1.3 電化學(xué)發(fā)光生物傳感器及其類型22-26
• 1.3.1 生物傳感器22
• 1.3.2 電化學(xué)發(fā)光生物傳感器22
• 1.3.3 標(biāo)記型電化學(xué)發(fā)光生物傳感器22-24
• 1.3.4 免標(biāo)記型電化學(xué)發(fā)光生物傳感器24-26
• 1.4 本文研究思路及創(chuàng)新點(diǎn)26-28
• 參考文獻(xiàn)28-35
• 第2章 基于免疫球蛋白G和Protein A特異性結(jié)合作用的金黃色葡萄球菌ECL生物傳感器35-49
• 2.1 引言35-36
• 2.2 實(shí)驗(yàn)部分36-38
• 2.2.1 試劑與儀器36-37
• 2.2.2 細(xì)菌的培養(yǎng)、計(jì)數(shù)和前處理37
• 2.2.3 羧基化石墨烯-豬IgG復(fù)合物的制備37
• 2.2.4 金黃色葡萄球菌的熒光染色共聚焦顯微鏡成像37
• 2.2.5 ECL生物傳感器的制備37
• 2.2.6 金黃色葡萄球菌的ECL檢測(cè)37-38
• 2.3 結(jié)果與討論38-44
• 2.3.1 豬IgG對(duì)金黃色葡萄球菌的結(jié)合行為38
• 2.3.2 ECL檢測(cè)原理38-39
• 2.3.3 ECL生物傳感器的研究39-40
• 2.3.4 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化40-41
• 2.3.5 ECL分析參數(shù)41-42
• 2.3.6 特異性考察42-43
• 2.3.7 實(shí)際樣品檢測(cè)43-44
• 2.4 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 第3章 基于銅綠假單胞菌噬菌體特異性識(shí)別作用的銅綠假單胞菌ECL生物傳感傳感器49-61
• 3.1 引言49-50
• 3.2 實(shí)驗(yàn)部分50-51
• 3.2.1 試劑與儀器50
• 3.2.2 PA1的培養(yǎng)、計(jì)數(shù)和前處理50
• 3.2.3 羧基化石墨烯-PaP1復(fù)合物的制備50-51
• 3.2.4 ECL生物傳感器的制備51
• 3.2.5 PA1的ECL檢測(cè)51
• 3.3 結(jié)果與討論51-56
• 3.3.1 ECL檢測(cè)原理51-52
• 3.3.2 ECL生物傳感器的研究52-53
• 3.3.3 實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化53
• 3.3.4 ECL分析參數(shù)53-55
• 3.3.5 特異性考察55-56
• 3.3.6 實(shí)際樣品檢測(cè)56
• 3.4 結(jié)論56-58
• 參考文獻(xiàn)58-61
• 致謝61-63
• 發(fā)表論文及參加課題一覽表63

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本文編號(hào)：251510