【摘要】：研究目的:造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem cell transplantation,HSCT)在血液系統(tǒng)惡性疾病和非血液系統(tǒng)疾病中有著廣泛應(yīng)用,但移植后的移植物抗宿主病(GVHD)仍是移植相關(guān)死亡的首要原因,限制了其應(yīng)用。早在1966年Billingham提出了GVHD發(fā)病的三個(gè)要素:(1)移植物中含免疫活性細(xì)胞;(2)受體表達(dá)供體沒有的組織抗原;(3)受體處于免疫抑制狀態(tài)不能排斥移植物。大量研究發(fā)現(xiàn),雖然去除移植物中的T細(xì)胞或抑制其功能均能使GVHD的發(fā)生率或其嚴(yán)重程度降低,但卻增加了機(jī)會(huì)性感染及復(fù)發(fā)的幾率。近幾年,具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞調(diào)控GVHD成為新的研究熱點(diǎn),如間充質(zhì)干細(xì)胞、NK細(xì)胞、NK T細(xì)胞、CD4+CD25+Tregs等,它們通過抑制供者的同種反應(yīng)性T細(xì)胞對(duì)非己抗原的免疫攻擊,從而使GVHD的發(fā)生降低,但是上述細(xì)胞的缺點(diǎn)是它們的獲得、擴(kuò)增等均需要特殊的條件及設(shè)備,限制了其在臨床中廣泛應(yīng)用。另外一些研究報(bào)導(dǎo),受者自身的某些細(xì)胞如骨髓細(xì)胞、外周血單個(gè)核細(xì)胞、脾細(xì)胞同樣可以有效地降低GVHD的發(fā)生,而具有取材方便、易于獲得、安全性高、便于直接應(yīng)用等優(yōu)點(diǎn)的受者淋巴細(xì)胞受到人們重視。本實(shí)驗(yàn)旨在研究MHC半相合小鼠造血干細(xì)胞移植后,不同時(shí)間輸注不同數(shù)量的受者脾細(xì)胞,對(duì)GVHD的產(chǎn)生、發(fā)展的影響,并進(jìn)一步的探討其可能機(jī)制。研究?jī)?nèi)容:1,MHC半相合小鼠造血干細(xì)胞移植GVHD模型的建立2,移植后不同時(shí)間輸注不同數(shù)量的受者脾細(xì)胞對(duì)植入及GVHD發(fā)生的影響3,移植后+4d輸注受者脾細(xì)胞3×107,降低GVHD發(fā)生率的機(jī)制探討研究方法:1.MHC半相合小鼠造血干細(xì)胞移植GVHD模型的建立將受體小鼠根據(jù)輸注細(xì)胞數(shù)量的不同隨機(jī)分為4組,每組用8只小鼠。將實(shí)驗(yàn)分為A組:單純8Gy TBI預(yù)處理。B、C、D三組:預(yù)處理相同(8Gy TBI照射),分別輸注供鼠脾細(xì)胞量為1×107、3×107、6×107,A組僅輸注等量的生理鹽水。在移植后,監(jiān)控造血恢復(fù)情況、供體嵌合情況、受鼠的體征變化及組織病理學(xué)改變,并進(jìn)行GVHD的評(píng)分和診斷。2.移植后不同時(shí)間輸注不同數(shù)量的受者脾細(xì)胞對(duì)植入及GVHD發(fā)生率的影響根據(jù)移植后的時(shí)間及輸注受者細(xì)胞的數(shù)量,將實(shí)驗(yàn)分組為(1)移植后+1d輸注組:在移植后+1d(以移植C57BL/6動(dòng)員后脾細(xì)胞輸注當(dāng)天,作為第0天,下同)給予受鼠脾數(shù)量分別為1×107、3×107、6×107,對(duì)照組輸注等量生理鹽水。(2)移植后+4d輸注組:在移植后+4d給予受鼠脾細(xì)胞數(shù)量分別為1×107、3×107、6×107,對(duì)照組輸注等量生理鹽水。(3)移植后+7d輸注組:在移植后+7d輸注受鼠脾細(xì)胞數(shù)量分別為1×107、3×107、6×107,對(duì)照組輸注等量生理鹽水。在移植后監(jiān)控造血恢復(fù)情況、供體嵌合情況、受鼠的體征變化及組織病理學(xué)改變,并進(jìn)行GVHD的評(píng)分及診斷。3.移植后+4d輸注受者脾細(xì)胞3×107,降低GVHD發(fā)生率的機(jī)制探討在移植后+1d、+4d、+7d輸注等量受者細(xì)胞3×107,在移植后,監(jiān)控外周血的淋巴亞群比例變化和T淋巴細(xì)胞FasL的表達(dá)變化。研究結(jié)果:1,受鼠CB6F1給予8Gy TBI預(yù)處理,輸注MHC半相合親代供鼠C57經(jīng)G-CSF動(dòng)員后的脾臟單個(gè)核細(xì)胞,在輸注細(xì)胞數(shù)量為1×107時(shí),雖然受鼠能達(dá)到完全供者嵌合狀態(tài),但GVHD發(fā)生率僅為50%。而在輸注細(xì)胞數(shù)量為3×107、6×107時(shí),受鼠均能夠形成完全供者嵌合,其GVHD發(fā)生率為100%,受鼠脾臟、小腸、皮膚、肝臟的病理結(jié)果呈現(xiàn)出典型的GVHD病理改變,表明成功的建立了H-2半相合小鼠Allo-HSCT移植物抗宿主病動(dòng)物模型。2,在移植后+1d分別輸注受者細(xì)胞數(shù)量為1×107、3×107的移植組,供體均獲得完全嵌合狀態(tài)(complete chimerism,CC),其GVHD發(fā)生率和死亡率均為100%,中位生存時(shí)間為18d~21d,而輸注6×107組,卻導(dǎo)致了移植排斥,移植受鼠全部因造血衰竭而死亡,中位生存時(shí)間為14d;在移植后+7d時(shí),分別輸注受者細(xì)胞量1×107、3×107、6×107的移植組,供體均獲得CC,其GVHD發(fā)生率和死亡率均為100%,中位生存時(shí)間為23d~28d;而在移植后+4d時(shí)輸注受者細(xì)胞量為3×107、6×107的移植組,供體均獲得CC,其GVHD發(fā)生率在20%~30%,顯著降低了GVHD的發(fā)生率,中位生存時(shí)間60d,顯著延長(zhǎng)受者存活時(shí)間;而在移植后+4d時(shí)輸注1×107組,GVHD的發(fā)生率為80%,中位生存時(shí)間為45d。3,在正常供鼠(C57)中,CD3+CD4+FasL、CD3+CD8+FasL的表達(dá)率分別為(0.3±0.06)%、(0.4±0.11)%。在移植后+10d,陽(yáng)性對(duì)照組(8Gy TBI輸注供者細(xì)胞3×107)中外周血供者CD3+CD4+FasL、CD3+CD8+FasL的表達(dá)率為(72.12±19.05)%、(36.23±15.73)%,顯著高于正常供鼠的表達(dá)(P0.05)。而在+4d輸注組(移植后+4d輸注受者細(xì)胞3×107)中CD3+CD4+FasL、CD3+CD8+FasL的表達(dá)率分別為(10.14±7.26)%、(6.12±5.75)%,顯著低于陽(yáng)性對(duì)照組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01),與+1d輸注組(移植后+1d輸注受者細(xì)胞3×107):CD3+CD4+FasL:(51.52±11.12)%、CD3+CD8+FasL:(13.13±3.35)%比較P0.05,與+7d輸注組(移植后+7d輸注受者細(xì)胞3×107):CD3+CD4+FasL:(68.16±13.25)%、CD3+CD8+FasL:(36.14±9.64)%比較P0.01,具有顯著性差異。研究結(jié)論:1,本研究成功建立了H-2半相合小鼠移植GVHD動(dòng)物模型,為進(jìn)一步研究GVHD的機(jī)制提供了理想的平臺(tái);2,在MHC半相合小鼠造血干細(xì)胞移植后+4d時(shí)輸注受者細(xì)胞能顯著降低GVHD發(fā)生率,延長(zhǎng)生存時(shí)間;而在移植后+1d、+7d時(shí),并不能降低GVHD發(fā)生率。3,MHC半相合小鼠造血干細(xì)胞移植后輸注受者脾細(xì)胞,輸注的時(shí)間不同,會(huì)導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞的表面FasL的表達(dá)呈現(xiàn)出不同的狀態(tài)。受者細(xì)胞在移植后+4d輸注比+1d、+7d輸注能更明顯的降低T淋巴細(xì)胞FasL的表達(dá)。
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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R457.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 鄧曉輝,梁輝,嚴(yán)云,郭若冰,朱楊,馬靜秋;移植物與受體T細(xì)胞的平衡對(duì)移植物抗宿主病影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];上海醫(yī)學(xué);2005年04期

2 魏家臣;Fas/FasL介導(dǎo)凋亡細(xì)胞機(jī)制及其病理生理意義(文獻(xiàn)綜述)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).外科學(xué)分冊(cè);2003年01期

3 馮曉勤,周淑蕓,劉啟發(fā),孫競(jìng),馮茹,朱衛(wèi)國(guó),楊藝;T細(xì)胞表達(dá)FasL與急性移植物抗宿主病相關(guān)性研究[J];中華血液學(xué)雜志;2002年10期

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本文編號(hào)：2256466