本文選題：金黃色葡萄球菌 + 綠膿桿菌�。� 參考：《中國比較醫(yī)學(xué)雜志》2017年05期

【摘要】：目的建立金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和肺炎克雷伯桿菌多重PCR檢測方法,為實驗動物細菌檢測提供快速、靈敏、簡便的方法。方法根據(jù)金黃色葡萄球菌nuc基因、綠膿桿菌Las I基因、肺炎克雷伯桿菌Pho E基因和細菌通用16S rRNA基因設(shè)計出特異性引物;經(jīng)過多重PCR引物濃度和退火溫度的優(yōu)化,特異性和敏感性的檢測,建立多重PCR體系。應(yīng)用該PCR體系對人工感染標(biāo)本、實驗動物糞便樣本進行驗證檢測,與傳統(tǒng)檢測方法對比。結(jié)果多重PCR分別擴增出金黃色葡萄球菌(153 bp)、綠膿桿菌(600 bp)、肺炎克雷伯桿菌(368 bp)和通用(520 bp)的目的條帶。多重敏感性為10 pg,特異性檢測未從其他細菌中檢測出目的條帶。應(yīng)用建立的多重PCR體系檢測出不同組合的人工感染標(biāo)本,從76只糞便檢測出綠膿桿菌陽性1例,與傳統(tǒng)檢測方法結(jié)果一致。結(jié)論本文建立的多重PCR方法具有特異、靈敏、簡便、快速等優(yōu)點,為實驗動物微生物的快速檢測提供了可靠的方法。
[Abstract]:Objective to establish a multiplex PCR method for the detection of Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Klebsiella pneumoniae. Methods specific primers were designed according to Staphylococcus aureus nuc gene, Pseudomonas aeruginosa Las I gene, Klebsiella pneumoniae Pho E gene and bacterial general 16s rRNA gene. A multiplex PCR system was established for the detection of specificity and sensitivity. The PCR system was used to verify and detect the samples of artificial infection and animal faeces, and compared with the traditional methods. Results the target bands of Staphylococcus aureus 153 BP, Pseudomonas aeruginosa 600 BP, Klebsiella pneumoniae 368 BP and General purpose 520 BP) were amplified by multiplex PCR. The multiplex sensitivity was 10 PG, and the target bands were not detected by specific detection from other bacteria. The multiplex PCR system was used to detect different combinations of artificially infected specimens. One case of Pseudomonas aeruginosa positive was detected from 76 feces, which was consistent with the traditional method. Conclusion the multiplex PCR method developed in this paper has the advantages of specificity, sensitivity, simplicity and rapidity, which provides a reliable method for the rapid detection of microbes in laboratory animals.
【作者單位】： 河北省實驗動物重點實驗室河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部;河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院;
【基金】：國家科技支撐計劃(2015BAI07B02-05)
【分類號】：R440

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本文編號：1992161