本文關(guān)鍵詞： 表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體突變體III ~(131)I 靶向超聲造影劑　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:制備以EGFRvⅢ為靶點(diǎn),EGFRvⅢ的單抗4G1為靶向分子的靶向高分子納米超聲造影劑,并對(duì)其性質(zhì)及體外靶向能力進(jìn)行研究。第一部分表皮生長(zhǎng)因子受體突變體III(EGFRvⅢ)單抗4G1的特異性驗(yàn)證方法:培養(yǎng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞F98EGFR(EGFR+/EGFRvⅢ-)和F98_(npEGFRvⅢ)(EGFR-/EGFRvⅢ+),對(duì)細(xì)胞蛋白進(jìn)行免疫印跡(WB)實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證抗體4G1對(duì)EFGRvⅢ蛋白的特異性;對(duì)F98EGFR和F98_(npEGFRvⅢ)細(xì)胞進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)(FCM)和免疫熒光(IF)實(shí)驗(yàn)以驗(yàn)證抗體4G1與EFGRvⅢ陽(yáng)性細(xì)胞的特異性結(jié)合;氯胺T法制備~(131)I-4G1,以探究抗體4G1與細(xì)胞穩(wěn)定結(jié)合的最佳時(shí)間。結(jié)果:4G1與F98_(npEGFRvⅢ)細(xì)胞蛋白結(jié)合出現(xiàn)免疫印跡條帶,而不與F98EGFR細(xì)胞蛋白結(jié)合出現(xiàn)免疫印跡條帶;4G1與F98_(npEGFRvⅢ)細(xì)胞的結(jié)合率為(90.84±0.56)%,與F98EGFR細(xì)胞的結(jié)合率僅為(2.90±0.07)%;熒光顯微鏡下,F98_(npEGFRvⅢ)細(xì)胞的胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞膜呈綠色熒光,F98EGFR僅有胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞膜外無(wú)綠色熒光;氯胺T法制備的13lI-4G1在30 min、60 min、120 min、240 min和480 min時(shí)與F98_(npEGFRvⅢ)細(xì)胞的結(jié)合率分別為(39.45±0.06)%、(49.19±0.48)%、(69.64±0.19)%、(59.19±0.63)%和(55.79±0.69)%,與F98EGFR細(xì)胞在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的結(jié)合率分別為(2.91±0.21)%、(2.97±0.75)%、(2.95±0.65)%、(2.96±0.43)%和(3.02±0.50)%。結(jié)論:單抗4G1僅能夠特異性地識(shí)別EGFRvⅢ陽(yáng)性細(xì)胞蛋白,13lI-4G1僅與EGFRvⅢ陽(yáng)性的F98_(npEGFRvⅢ)細(xì)胞特異性結(jié)合,且在120min時(shí)與F98_(npEGFRvⅢ)細(xì)胞的結(jié)合率最高。第二部分?jǐn)yEGFRvⅢ抗體4G1的PLGA納米球的制備及其性質(zhì)研究方法:采用雙乳化溶劑揮發(fā)法制備包裹液態(tài)氟碳的高分子納米球(P-NPs);碳二亞胺法(EDC/NHS)偶聯(lián)P-NPs與4G1抗體,獲得靶向EGFRvⅢ的高分子納米球P-NPs-4G1;光鏡和掃描電鏡下觀察P-NPs-4G1的形態(tài)及分布特征;激光粒徑儀檢測(cè)P-NPs-4G1的粒徑及Zeta電位;流式細(xì)胞術(shù)與激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)P-NPs與4G1的偶聯(lián)情況;倒置熒光顯微鏡下觀察熱作用致P-NPs-4G1相變前后情況;超聲診斷儀檢測(cè)P-NPs-4G1在體外經(jīng)低強(qiáng)度聚焦超聲(LIFU)輻照致相變前后情況;流式細(xì)胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)P-NPs-4G1在體外與腫瘤細(xì)胞的靶向結(jié)合情況;在裸鼠腫瘤模型上,檢測(cè)P-NPs-4G1在體內(nèi)的靶向超聲顯像情況。結(jié)果:所制備的P-NPs-4G1納米球外觀呈乳懸液狀;光鏡下形態(tài)規(guī)則,呈球形;電鏡下呈球形或類(lèi)球形,表面光滑,形態(tài)規(guī)則;粒徑儀測(cè)得P-NPs-4G1的平均粒徑為(563.8±60.3)nm,表面電位(-32.4±3.37)m V;P-NPs與4G1的連接率為(97.37±1.57)%;P-NPs-4G1體外經(jīng)熱作用后可發(fā)生明顯的液氣相轉(zhuǎn)變產(chǎn)生微氣泡;經(jīng)LIFU輻照后發(fā)生相變而產(chǎn)生微氣泡,超聲波診斷儀檢測(cè)超聲顯像效果增強(qiáng);在體外靶向?qū)嶒?yàn)中證實(shí)P-NPs-4G1可與EGFRvⅢ陽(yáng)性的F98_(npEGFRvⅢ)(EGFR-/EGFRvⅢ+)細(xì)胞特異性結(jié)合,而不與EGFR陽(yáng)性的F98EGFR(EGFR+/EGFRvⅢ-)細(xì)胞結(jié)合;在裸鼠腫瘤模型上,P-NPs-4G1經(jīng)尾靜脈注射、LIFU輻照后的體內(nèi)超聲顯像未得到理想的結(jié)果。結(jié)論:本研究成功制備出能夠特異性靶向EGFRvⅢ并包裹液態(tài)氟碳的高分子納米球P-NPs-4G1,其性質(zhì)穩(wěn)定,在體外經(jīng)聲熱作用后可發(fā)生液氣相轉(zhuǎn)變,增強(qiáng)超聲顯像效果,在體外能特異性的與EGFRvⅢ陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞結(jié)合。
[Abstract]:Objective : To investigate the specific binding rate of F98EGFR ( EGFR + / EGFRv 鈪，

本文編號(hào)：1538415