本文關(guān)鍵詞：以臍帶間充質(zhì)干細胞為載體的靶向基因治療系統(tǒng)聯(lián)合5-FU對裸鼠HepG2移植瘤的作用　出處：《山東醫(yī)藥》2017年26期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的構(gòu)建以人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUMSCs)為載體的靶向基因治療系統(tǒng),觀察該系統(tǒng)聯(lián)合低劑量5-FU對裸鼠HepG2移植瘤的治療作用。方法采用組織塊接種法從新鮮無菌新生兒臍帶中分離HUMSCs,利用PCR、重疊PCR、酶切、連接等分子生物學(xué)技術(shù)構(gòu)建慢病毒表達質(zhì)粒LentiR.E1A和腺病毒穿梭質(zhì)粒pAd-hTERTpIL24,并包裝慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24。采用Transwell實驗觀察慢病毒和腺病毒共感染對HUMSCs向HepG2細胞趨化的影響。采用皮下接種的方法建立HepG2移植瘤模型,將荷瘤小鼠分成5組各5只,分別給予尾靜脈注射PBS、HUMSCs、低劑量5-FU、慢病毒感染HUMSCs聯(lián)用低劑量5-FU、雙病毒共感染HUMSCs聯(lián)用低劑量5-FU的治療,比較各組的抑瘤效應(yīng)。利用BD Annexin-Ⅴ-PE凋亡試劑盒檢測腺病毒Ad-hTERTp-IL24與低劑量5-FU聯(lián)用誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡情況。結(jié)果成功構(gòu)建了慢病毒表達載體p LentiR.E1A和腺病毒表達載體pAd-hTERTp-IL24,并成功包裝出了慢病毒LentiR.E1A和腺病毒Ad-hTERTp-IL24。Transwell實驗顯示,慢病毒和腺病毒共感染HUMSCs向腫瘤細胞的遷移能力無明顯改變。聯(lián)合低劑量5-FU治療裸鼠肝移植瘤中治療組腫瘤體積較對照組減小(P0.01)。Ad-hTERTp-IL24與低劑量5-FU聯(lián)用誘導(dǎo)腫瘤微環(huán)境內(nèi)的腫瘤細胞發(fā)生凋亡,其熒光強度明顯強于Ad-Track+5-Fu組和5-Fu組。結(jié)論成功構(gòu)建了以HUMSCs為載體的靶向基因治療系統(tǒng),由HUMSCS.LentiR.E1A運載攜帶抑瘤基因的腺病毒Ad-hTERTp-IL24聯(lián)用低劑量5-FU對裸鼠HepG2移植瘤有明顯抑制作用。
[Abstract]:Objective to construct a human umbilical cord mesenchymal stem cells (HUMSCs) treatment system as the carrier of targeted gene, to observe the therapeutic effect of the 5-FU system combined with low dose of HepG2 xenografts in nude mice. Methods using tissue explant method HUMSCs isolated from fresh sterile umbilical cord by PCR and overlap PCR, enzyme digestion, connection etc. molecular biological techniques to construct lentiviral plasmid LentiR.E1A and Adenovirus Shuttle Plasmid pAd-hTERTpIL24 expression, and packaging of lentivirus LentiR.E1A and adenovirus Ad-hTERTp-IL24. Transwell to observe the lentivirus and adenovirus infection of HUMSCs to HepG2 cell chemotactic effect. Methods by subcutaneous inoculation to establish HepG2 transplanted tumor model, the mice were divided into 5 groups the 5 rats were given intravenous injection of PBS, HUMSCs, 5-FU combined with low dose, low dose 5-FU HUMSCs lentivirus infection, two virus co infection of HUMSCs combined with low dose 5-FU treatment Treatment effect of tumor were compared. Combined with the induction of apoptosis of hepatoma cells by adenovirus Ad-hTERTp-IL24 detection BD Annexin- V -PE apoptosis kit with low dose of 5-FU. The successful construction of Lentivirus Expression vector p LentiR.E1A and adenovirus expression vector pAd-hTERTp-IL24, and successfully packaged display LentiR.E1A lentivirus and adenovirus Ad-hTERTp-IL24.Transwell experiment lentivirus and adenovirus, CO infection of HUMSCs to the migration of tumor cells had no obvious change. Combined with low dose 5-FU in the treatment of liver tumor in nude mice in the treatment group than the control group reduced tumor volume (P0.01) and.Ad-hTERTp-IL24 combined with low dose of 5-FU within the tumor microenvironment induced apoptosis of tumor cells, the fluorescence intensity was stronger than Ad-Track+5-Fu group and 5-Fu group. Conclusion the successful construction of the carrier of targeted gene therapy system based on HUMSCs, by HUMSCS.LentiR.E1A carrying articles The adenovirus Ad-hTERTp-IL24 with a tumor suppressor gene combined with low dose 5-FU has a significant inhibitory effect on HepG2 xenografts in nude mice.

【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院血液學(xué)研究所;西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院;
【基金】：國家科技重大專項基金資助項目(2012ZX09102301-015)
【分類號】：R450;R735.7
【正文快照】： 肝癌由于其發(fā)病隱匿,患者被確診時往往已達晚期并伴隨肝功能不全,多數(shù)預(yù)后很差。目前,針對肝癌的傳統(tǒng)治療手段包括手術(shù)、化療和放療等,但療效均欠佳。隨著腫瘤分子生物學(xué)和現(xiàn)代細胞分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展,基因治療成為未來腫瘤治療的新希望。間充質(zhì)干細胞具有來源廣泛、擴

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