本文關(guān)鍵詞：靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米造影劑多模態(tài)顯像與治療研究　出處：《重慶醫(yī)科大學(xué)》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：第一部分靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米造影劑FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的制備及性能檢測目的 制備一種葉酸修飾的靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米粒(FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid),檢測其粒徑電位、穩(wěn)定性、相變特性、藥物含量、藥物釋放及體內(nèi)外靶向性等。方法 采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)-超聲法制備靶向相變型載HCPT液態(tài)氟碳脂質(zhì)納米粒FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid,對其形態(tài)大小特征、粒徑電位、鐵含量進(jìn)行檢測。并于制備后不同時間點(0.5 h,1 h,2 h,6 h,12 h,24 h,36 h,48 h,60h,72 h,96 h)測量納米粒粒徑,光鏡下觀察不同溫度下(40°C、45°C、50°C和55°C)納米粒的相變情況,用高效液相色譜法檢測FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid內(nèi)的藥物含量、體外藥物釋放及低強度聚焦超聲LIFU促進(jìn)藥物釋放。使用細(xì)胞實驗和動物實驗驗證納米粒FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的靶向性能。結(jié)果 制備的FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳呈棕褐色,光鏡及熒光顯微鏡下納米粒呈球形或點狀,透射電鏡顯示細(xì)點狀Fe3O4顆粒均勻分布在殼層內(nèi)。Malvern激光粒徑儀檢測出FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid粒徑321±67nm,Zeta電位為-50m V。原子吸收光譜法測得不同濃度的FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳(5μg m L-1,10μg m L-1,20μg m L-1,40μg m L-1,80μg m L-1,160μg m L-1,320μg m L-1,640μg m L-1,1280μg m L-1和2560μg m L-1)中的Fe濃度分別為(0.43±0.08μg m L-1,0.71±0.09μg m L-1,1.63±0.31μg m L-1,3.52±1.21μg m L-1,7.60±1.35μg m L-1,15.05±3.16μg m L-1,29.12±4.05μg m L-1,53.32±5.25μg m L-1,117.65±6.36μg m L-1和236.37±11.97μg m L-1)。在4°C條件下,納米粒粒徑在48小時內(nèi)無明顯增大,48小時后粒徑緩慢增大。40°C時納米�；颈３址�(wěn)定,45°C時部分納米粒發(fā)生液氣相變,體積增大,50°C時相變納米粒數(shù)量明顯增多,體積增大明顯,55°C時僅存少量相變納米粒。FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液藥物包封率為60.51%±2.33%,載藥量為8.33%±0.57%。體外藥物釋放試驗顯示,FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液內(nèi)的藥物HCPT呈緩慢釋放,24小時釋放約25%,48小時釋放約60%,60小時后藥物釋放趨平緩。隨著LIFU強度的增加,藥物釋放量亦隨著增加。結(jié)論 本實驗成功的制備了造影劑FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid,形態(tài)規(guī)則,大小較均勻,性質(zhì)穩(wěn)定,具有較好的液氣相變的能力,能夠在LIFU作用下釋放藥物。第二部分FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑增強超聲、光聲及磁共振顯像研究目的 觀察FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑體外增強超聲、光聲和磁共振顯像的效果,研究其作為多模態(tài)造影劑的可行性;體內(nèi)實驗了解FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑增強超聲、光聲和磁共振顯像的能力。方法 本部分實驗分為三節(jié)分別進(jìn)行。在第一節(jié)中首先使用加熱的方法,了解在不同溫度條件下納米乳增強超聲顯影的效果,并于顯微鏡下觀察加熱后納米粒相變情況。體外及體內(nèi)聲致相變實驗中,LFIU儀使用不同聲強度(0.8W/cm2、1.6W/cm2、2.4 W/cm2、3.2 W/cm2)及不同時間(1min、2min、3min、4min),觀察LIFU輻照后納米乳于體外及體內(nèi)增強超聲顯影的效果,了解導(dǎo)致納米粒相變的最佳LIFU輻照強度及時間。在第二節(jié)里,將Fe3O4溶液、FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液及FA/PFP/HCPT@Lipid乳液分別行光聲顯影實驗,了解Fe3O4增強光聲信號的效果。并用不同濃度FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid行光聲顯影,了解光聲信號強度的變化。在細(xì)胞光聲實驗中,SKOV3細(xì)胞與FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米粒孵育不同時間后觀察細(xì)胞光聲信號強度。體內(nèi)光聲實驗中,經(jīng)裸鼠尾靜脈分別注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液、Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液和不含F(xiàn)e3O4的造影劑FA/PFP/HCPT@Lipid乳液,于注射之后0.5 h、1 h、6h分別行光聲顯像。在第三節(jié)里,將FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳配置成不同的濃度,觀察磁共振顯影的差異。體內(nèi)磁共振實驗中,經(jīng)裸鼠尾靜脈分別注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液、Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液和不含F(xiàn)e3O4的造影劑FA/PFP/HCPT@Lipid乳液,于注射之后0.5 h、1 h、6 h分別行磁共振顯像。結(jié)果 在第一節(jié)中,諧波超聲模式下,水浴鍋溫度為40°C時,水囊內(nèi)無增強。45°C和50°C時,水囊內(nèi)顯影明顯增強。至55°C時,水囊內(nèi)回聲增強又相對減弱。于45°C和50°C水囊吸出的乳液在光鏡下可見到較多氣泡產(chǎn)生。體外LIFU聲致相變實驗結(jié)果顯示,2.4W/cm2、2分鐘有最佳的聲致相變效果,此時顯微鏡下相變氣泡較多。體內(nèi)相變實驗結(jié)果顯示,3.2W/cm2、2分鐘的LIFU條件具有最佳的體內(nèi)相變效果。在第二節(jié)里,Fe3O4和FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液顯示較強的光聲信號,而FA/PFP/HCPT@Lipid乳液幾乎不顯示光聲增強信號。FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的光聲信號隨著Fe3O4濃度的升高而逐漸增強。細(xì)胞光聲實驗中,隨著納米粒與SKOV3細(xì)胞孵育時間的延長,光聲信號明顯增加。體內(nèi)光聲實驗中,注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液的裸鼠其腫瘤于注射后1小時顯示明顯光聲信號,腫瘤局部光聲信號強度值明顯高于另外兩組(P0.05)。在第三節(jié)的體外實驗中,FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid呈現(xiàn)磁共振負(fù)性顯影,且隨著裝載的Fe3O4濃度的增加,MR信號強度逐漸下降。體內(nèi)磁共振實驗中,注射FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid的裸鼠其腫瘤于注射后1小時顯示明顯磁共振負(fù)性顯影信號,腫瘤局部磁共振信號強度值明顯低于另外兩組(P0.05)。結(jié)論 FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑能夠于體內(nèi)外增強超聲、光聲和磁共振顯像,具備成為多模態(tài)造影劑的潛能。第三部分FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑靶向治療卵巢癌實驗研究目的 了解FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑及藥物HCPT在裸鼠體內(nèi)的分布情況,以及FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid造影劑對SKOV3卵巢癌的靶向治療效果。方法 造影劑及藥物體內(nèi)分布實驗:將30只荷瘤裸鼠隨機分為兩組,分別經(jīng)尾靜脈注射攜熒光Di I的造影劑FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液和Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid乳液,于注射后0.5h,1h,6h,12h,24h脫頸處死裸鼠,瘤塊行超薄切片,顯微鏡下觀察切片內(nèi)造影劑分布情況。取50只荷瘤裸鼠隨機分為兩組,分別經(jīng)尾靜脈注射HCPT注射液和FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳,于注射后0.5h,1h,6h,12h,24h眼球取血處死裸鼠,檢測血清內(nèi)藥物濃度分布,同時取裸鼠重要臟器及腫瘤組織勻漿后行高效液相色譜法檢測各組織內(nèi)藥物濃度。另外檢測LIFU作用后腫瘤局部藥物濃度分布。靶向治療實驗:將30只裸鼠隨機分為6組,分別給予不同的處理:FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組;FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid注射液組;HCPT組;FA/Fe3O4/PFP@Lipid+LIFU組;Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid注射組;生理鹽水組。治療后測量腫瘤大小,計算腫瘤生長曲線及抑瘤率。行免疫組織化學(xué)檢測腫瘤細(xì)胞的增殖和凋亡。結(jié)果 造影劑及藥物體內(nèi)分布實驗:靶向組腫瘤超薄切片各時間點均可見熒光,1小時熒光最明顯。而非靶向組未見熒光顯示。在每一個檢測時間點,FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳組裸鼠的血藥濃度均高于HCPT注射液組。FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid注射液組的腫瘤組織藥物濃度顯著高于HCPT注射組(P0.05),而FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組的腫瘤組織藥物濃度顯著高于FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid納米乳注射液組(P0.05)。靶向治療實驗:FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組裸鼠腫瘤生長指數(shù)最低,抑瘤率最高。免疫組化結(jié)果顯示,FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid+LIFU組的增殖指數(shù)最低(p0.05),凋亡指數(shù)最高(p0.05)。結(jié)論 納米粒FA/Fe3O4/PFP/HCPT@Lipid可以延緩藥物HCPT在體內(nèi)的存留時間,靶向結(jié)合于腫瘤細(xì)胞的納米粒,在低強度聚焦超聲LIFU的作用下,對裸鼠卵巢癌有良好的治療效果,有望對腫瘤的治療開辟新的途徑。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R445

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本文編號：1354427