本文關(guān)鍵詞：烏司他丁對(duì)血小板激活介導(dǎo)Sepsis所致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用研究

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【摘要】：目的：觀察烏司他丁對(duì)血小板激活介導(dǎo)的LPS所致內(nèi)皮細(xì)胞損傷的作用影響。方法：1、取健康志愿者肘靜脈血,分離血小板,將血小板隨機(jī)分為對(duì)照組、LPS組、烏司他丁組、TLR4單克隆抗體組四組。其中,LPS組分別加入不同濃度的LPS與血小板共培養(yǎng),LPS濃度為0.5、1、5、10μg/ml,烏司他丁組分別加入不同濃度的烏司他丁與血小板和LPS共培養(yǎng),烏司他丁濃度為5000、10000、15000、20000U/ml,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組血小板TLR4的表達(dá),選擇對(duì)血小板TLR4表達(dá)影響最明顯的LPS和烏司他丁濃度。2、分離健康志愿者中性粒細(xì)胞和血小板,與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng),隨機(jī)分為6組,分別為正常對(duì)照組、LPS組、烏司他丁組、血小板TLR4抗體組、無(wú)血小板組、烏司他丁+無(wú)血小板組。各組分別在3、6、18h采用中性粒細(xì)胞外誘捕網(wǎng)(NETs)快速定量檢測(cè)法(PicoGreen dsDNA assay)檢測(cè)NETs,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)人內(nèi)皮細(xì)胞特異分子-1(Endocan)、人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1(VCAM-1),對(duì)NETs與endocan、VCAM-1表達(dá)量進(jìn)行相關(guān)分析,相關(guān)性分析采用皮爾森(Pearson)相關(guān)分析。結(jié)果：1、LPS對(duì)血小板TLR4表達(dá)的影響：對(duì)照組血小板表達(dá)TLR4為40.99±1.22%,LPS濃度達(dá)到5ug/ml能明顯上調(diào)血小板TLR4表達(dá)(P0.01)。2、烏司他丁對(duì)LPS誘導(dǎo)下血小板TLR4表達(dá)的影響：烏司他丁呈濃度依賴性的下調(diào)LPS誘導(dǎo)的血小板TLR4表達(dá),與對(duì)照組相比,烏司他丁濃度達(dá)到15000U/ml能明顯下調(diào)LPS誘導(dǎo)血小板TLR4表達(dá)(P0.01)。3、各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系中NETs表達(dá)量的比較：①LPS組3/6/18h時(shí)間點(diǎn)上清液中NETs表達(dá)量較同一時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組顯著增高(P0.01)；②與LPS組同一時(shí)間點(diǎn)比,無(wú)血小板組3/6/18h時(shí)間點(diǎn)上清液中NETs表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)LPS組顯著下降,差異顯著(P0.05)；血小板TLR4抗體組3/6/18h時(shí)間點(diǎn)上清液中NETs表達(dá)量均下降,其中18h組有顯著差異(P0.05)；烏司他丁組3/6/18h上清液NETs表達(dá)量均顯著下降(P0.05)；③與烏司他丁組同一時(shí)間點(diǎn)比較,烏司他丁+無(wú)血小板組3/18h上清液NETs表達(dá)量均顯著下降(P0.01)。4、各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系中endocan表達(dá)量的比較：①LPS3/6/18h組endocan表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組顯著增加(P0.01)；②無(wú)血小板3/6/18h組,上清液中endocan表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)LPS組減少(P0.05)；③血小板TLR4抗體3/6/18h組,上清液中endocan表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)LPS組減少(P0.05)；④烏司他丁18h組endocan的表達(dá)較LPS18h組顯著下降(P0.05)；⑤烏司他丁+血小板3/6/18h組endocan的表達(dá)較烏司他丁組均下降,3h組差異顯著(P0.01)。5、各組臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)體系中VCAM-1表達(dá)量的比較：①LPS3/6/18h組VCAM-1表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組顯著增加(P0.01)。②無(wú)血小板3/6/18h組,上清液中VCAM-1表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)LPS組減少(P0.05)。③血小板TLR4抗體3/6/18h組,上清液中VCAM-1表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)LPS組減少(P0.05)。④烏司他丁3/6/18h組上清液中VCAM-1表達(dá)量均較同一時(shí)間點(diǎn)LPS組減少(P0.05)。⑤烏司他丁+血小板3/6/18h組VCAM-1的表達(dá)較烏司他丁組均下降,3/6h組差異顯著(P0.01)。6、各組NETs表達(dá)量和endocan、VCAM-1相關(guān)分析：上清液endocan、VCAM-1的表達(dá)量與LPS誘導(dǎo)產(chǎn)生的NETs表達(dá)量呈正相關(guān)(r=0.871,P0.001; r=0.747, P=0.005)。結(jié)論：(1)LPS通過(guò)增加血小板TLR4表達(dá)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞損傷和NETs的增加；(2)烏司他丁降低LPS誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷和NETs表達(dá),該作用可能通過(guò)血小板及其TLR4介導(dǎo)；(3)NETs介導(dǎo)LPS引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷。
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳欣;周麗華;黃志民;董重陽(yáng);林靖;張利鵬;李德平;;烏司他丁對(duì)內(nèi)毒素心肌損傷大鼠Toll樣受體4表達(dá)的影響[J];中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué);2012年12期

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本文編號(hào)：1260167