本文關(guān)鍵詞：奇異變形桿菌聚磷酸鹽激酶多克隆抗體的制備和鑒定

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【摘要】：目的表達(dá)、純化奇異變形桿菌聚磷酸鹽激酶(PPK)蛋白,制備PPK多克隆抗體。方法利用分子生物學(xué)軟件分析奇異變形桿菌PPK的抗原性、疏水性等參數(shù),選取N端較保守的309個(gè)氨基酸,并對其基因序列進(jìn)行密碼子優(yōu)化以利于原核表達(dá)。合成新的基因序列后插入pET28b(+)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化入轉(zhuǎn)化宿主菌BL21(DE3),誘導(dǎo)、表達(dá)融合蛋白。通過鎳瓊脂糖親和層析技術(shù),將獲得的融合蛋白進(jìn)行純化。以純化的蛋白作為免疫原并結(jié)合使用佐劑,背部多點(diǎn)注射新西蘭大白兔,ELISA檢測兔血清效價(jià),Western Blotting驗(yàn)證抗體特異性。結(jié)果成功構(gòu)建了奇異變形桿菌PPK的原核表達(dá)重組質(zhì)粒,可在0.5 mmol/L IPTG、37℃條件下獲得較好的誘導(dǎo)、表達(dá);利用鎳柱純化后的PPK蛋白與免疫佐劑一起,采用背部多點(diǎn)接種新西蘭大白兔,制備了效價(jià)高的兔抗血清。ELISA檢測血清效價(jià)達(dá)到1∶512 000,Western Blotting對ppk基因缺失株及其野生株進(jìn)行驗(yàn)證顯示抗體特異性良好。結(jié)論利用pET28b(+)載體可構(gòu)建奇異變形桿菌PPK的原核表達(dá)重組質(zhì)粒,表達(dá)、純化后的蛋白與佐劑共同免疫新西蘭大白兔,可獲得效價(jià)高、特異性良好的兔多克隆抗體血清,為奇異變形桿菌聚磷酸鹽激酶的檢測以及深入研究PPK在奇異變形桿菌致病中的作用奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院檢驗(yàn)科;廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院血液科;南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院//廣東省熱帶病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 微生物學(xué)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81670637) 廣州市屬高�？萍柬�(xiàng)目(1201430488) 廣州醫(yī)科大學(xué)青年項(xiàng)目(2014A06)~~
【分類號】：R446.6
【正文快照】： 奇異變形桿菌為條件致病菌,可引起尿路感染、食物中毒、肺炎等多種疾病。其中以泌尿系統(tǒng)感染最常見,并可導(dǎo)致結(jié)石的出現(xiàn)。最近有調(diào)查表明,奇異變形桿菌檢出率在尿路感染患者分離的革蘭陰性桿菌中排在第4位[1]。我們課題組則發(fā)現(xiàn),奇異變形桿菌臨床分離株超廣譜β-內(nèi)酰胺酶陽性

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 應(yīng)春妹;何澄;汪雅萍;葉楊芹;張灝e

本文編號：1237075