本文關(guān)鍵詞：膿毒癥大鼠肝細(xì)胞線粒體功能損傷機(jī)制的研究

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【摘要】：目的膿毒癥和感染性休克已成為重癥患者的主要死亡原因,肝臟是膿毒癥病程中易受累的重要器官之一。膿毒癥狀態(tài)下,肝細(xì)胞線粒體功能異常,繼之出現(xiàn)肝細(xì)胞水腫、凋亡和壞死。水通道蛋白8(AQP8)是位于線粒體內(nèi)膜的重要水通道蛋白,是調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)外水轉(zhuǎn)運(yùn)的重要通道蛋白,對(duì)維持線粒體正常結(jié)構(gòu)和功能起著十分重要的作用。本文進(jìn)一步探討膿毒癥狀態(tài)下大鼠肝細(xì)胞線粒體內(nèi)膜AQP8表達(dá)水平對(duì)肝細(xì)胞線粒體功能的影響。方法選用SD大鼠24只,雌雄各半,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(C組)、膿毒癥組(S組),每組12只。采用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)法建立大鼠膿毒癥模型。制模18h后處死大鼠,取出部分肝臟,用比色和熒光分析法,檢測(cè)肝細(xì)胞ATP含量；再采用差速離心法提取肝細(xì)胞線粒體,用激光共聚焦顯微鏡和流式細(xì)胞儀法檢測(cè)線粒體膜電位水平和線粒體腫脹度；采用可見(jiàn)分光光度法,測(cè)定線粒體膜Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性；裂解肝細(xì)胞線粒體,分離出線粒體內(nèi)膜蛋白,采用Western blot法檢測(cè)AQP8蛋白,采用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-time PCR)法檢測(cè)肝組織AQP8 mRNA的表達(dá)量；從腹主動(dòng)脈取血,采用酶偶聯(lián)速率法檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)和天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶(m-AST)。結(jié)果正常對(duì)照組大鼠血清ALT為(29.81±13.16)U/L、AST為(99.78±41.67)U/L和m.AST為(46.23±24.24)U/L,膿毒癥組ALT為(233.02±110.16)U/L、AST為(742.56±441.41)U/L和m-AST為(412.78±252.56)U/L,與正常對(duì)照組相比,膿毒癥組轉(zhuǎn)氨酶明顯升高(P0.01)。正常對(duì)照組大鼠肝細(xì)胞ATP含量為(94.65±17.79)nmol/mg,膿毒癥組ATP含量為(19.27±8.76)nmol/mg,比對(duì)照組明顯減少(P0.01)。正常對(duì)照組大鼠肝線粒體Na+-K+-ATP酶活性為(4.74±0.84)U/mgprot、Mg2+-ATP酶活性為(4.49±0.73)U/mgprot、Ca2+-ATP酶活性為(3.48±0.43)U/mgprot、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性為(4.68±0.81)U/mgprot,膿毒癥組Na+-K+-ATP酶活性為(2.81±o.81)U/mgprot、M2+-ATP酶活性為(2.59±1.03)U/mgprot、Ca2+-ATP酶活性為(1.63±1.26)U/mgprot、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性為(2.54±0.97)U/mgprot,與對(duì)照組相比,膿毒癥ATP酶活性水平明顯下降(P0.01)。正常對(duì)照組大鼠肝線粒體膜電位為(7.65±3.54)和線粒體腫脹度為(0.59±0.16),膿毒癥組膜電位為(1.73±1.06)和線粒體腫脹度為(1.07±0.43),線粒體膜電位水平較對(duì)照組明顯下降、腫脹度較對(duì)照組明顯增大(P0.01)。正常對(duì)照組大鼠肝線粒體內(nèi)膜AQP8蛋白表達(dá)量為(1.24±0.05)和AQP8 mRNA轉(zhuǎn)錄水平設(shè)為1.00,膿毒癥組大鼠肝線粒體內(nèi)膜AQP8蛋白表達(dá)量為(0.68±0.03)和AQP8 mRNA轉(zhuǎn)錄量為(0.34±0.19),較對(duì)照組分別下降約32.3%和65.7%,差異顯著(P0.01)。結(jié)論(1)膿毒癥組大鼠肝AQP8 mRNA轉(zhuǎn)錄量明顯減少,進(jìn)而引起肝線粒體內(nèi)膜上AQP8蛋白表達(dá)水平明顯下降；(2)膿毒癥大鼠肝細(xì)胞內(nèi)ATP含量明顯減少；(3)膿毒癥組大鼠肝線粒體膜電位水平明顯下降,腫脹度明顯增加；(4)膿毒癥組大鼠肝線粒體膜各ATP酶活性均明顯下降；(5)膿毒癥組大鼠肝AQP8的表達(dá)水平與肝組織ATP含量、線粒體膜電位、Na+-K+-ATP酶、Ca2'-ATP酶活性、Mg2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性成正相關(guān)；(6)膿毒癥導(dǎo)致肝細(xì)胞線粒體功能障礙的可能機(jī)制是,肝細(xì)胞線粒體AQP8mRNA表達(dá)減少,AQP8蛋白合成減少,引起線粒體腫脹,線粒體膜電位降低,線粒體膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性、Mg2+-ATP酶和Ca2+_Mg2+-ATP酶活性降低,線粒體功能進(jìn)一步下降,進(jìn)而導(dǎo)致肝細(xì)胞線粒體ATP合成減少,肝細(xì)胞功能障礙,直至肝細(xì)胞破壞。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R459.7

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前7條

1 李君;謝勁松;臧桂珍;;酶抑制法測(cè)定m-AST試劑性能評(píng)價(jià)及其在肝病中的意義[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2013年12期

2 劉海華;王錦權(quán);劉寶;陶曉根;鹿中華;查逾;杜慶;;川芎嗪對(duì)膿毒癥致兔急性腎損傷的保護(hù)作用[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年02期

3 曾其毅;王陽(yáng);錢(qián)新華;;膿毒癥大鼠腦線粒體功能損傷與氧化應(yīng)激的關(guān)系[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年11期

4 王秋卉;王錦權(quán);葉文;范驍欽;陶曉根;趙勁松;;膿毒癥對(duì)肝臟線粒體膜損傷機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)急救醫(yī)學(xué);2008年02期

5 劉朝巍;張濤;楊卓;;氧化應(yīng)激損傷線粒體參與癲癇病理過(guò)程[J];中國(guó)病理生理雜志;2008年01期

6 王秋卉;王錦權(quán);;膿毒癥與肝細(xì)胞線粒體損傷[J];中國(guó)急救醫(yī)學(xué);2007年06期

7 何振華;宋現(xiàn)青;張森;張薛磊;;盲腸結(jié)扎穿孔與腹腔持續(xù)置管引流兩種膿毒癥大鼠模型的比較[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2013年11期

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本文編號(hào)：1229848