發(fā)布時間：2020-02-03 17:47

【摘要】：制備了一種可用于腺苷檢測的適體生物傳感器,以羧基磁性微球為載體,在其表面組裝腺苷適體與地高辛修飾之腺苷適體互補的核酸短鏈,先加入一定濃度的腺苷,再連接抗地高辛的堿性磷酸酯酶,用化學(xué)發(fā)光法檢測發(fā)光值,根據(jù)腺苷加入前后化學(xué)發(fā)光強度的變化來定量檢測腺苷。實驗考察了羧基磁性微球用量、氨基修飾的腺苷適體用量、地高辛修飾的核酸短鏈用量及抗地高辛的堿性磷酸酯酶用量對體系組裝和腺苷識別的影響。結(jié)果顯示,優(yōu)化條件下,在1.0×10~(-7)~1.0×10~(-3)mol/L范圍內(nèi),腺苷濃度的對數(shù)與發(fā)光信號呈線性關(guān)系(r~2=0.976 9),定量下限為1.0×10~(-7)mol/L。與其他核苷相比,腺苷的選擇特異性更好,且在稀釋血清中適體對腺苷有很好的特異性識別能力。
【圖文】：

第4期嚴(yán)喜鸞等:基于適體生物傳感器的堿性磷酸酯酶化學(xué)發(fā)光檢測腺苷567也為進一步優(yōu)化適體用量以及報告序列用量研究奠定了基矗隨后詳細(xì)考察了反應(yīng)所用羧基磁性微球、氨基修飾的適體、報告序列以及抗地高辛－ALP的量對CL信號的影響。圖1腺苷的化學(xué)發(fā)光檢測示意圖Fig.1Schematicpresentationofadenosinechemiluminescentanalyticalprotocol2.1.1羧基磁性微球的用量考察了羧基磁性微球用量(20，30，40，50，60，80μg)對CL信號值的影響。結(jié)果顯示，羧基磁性微球用量為40μg時，CL信號值最大，之后信號隨其用量的增加反而下降，這是由于過量的磁性微球雖然為氨基適體增加了連接位點，但磁性微球量的增多對發(fā)光信號有吸收，反而使CL信號值降低，故實驗選擇40μg為羧基磁性微球的最佳用量。圖2氨基修飾的腺苷適體量的優(yōu)化選擇(n=3)Fig.2Optimalselectionofamountofaminomodifiedadenosineaptamer(n=3)2.1.2腺苷適體的用量考察了不同的氨基修飾腺苷適體用量(1.0，1.5，3.0，8.0，10pmol)對CL信號值的影響，結(jié)果如圖2所示。當(dāng)腺苷適體用量為1.5pmol時，CL信號值最大，之后隨其用量增加反而下降，這是由于隨著氨基適體量的增加，羧基磁性微球上連接的適體也增多，增大了空間位阻，導(dǎo)致結(jié)合的報告序列量減少，降低了CL信號值，故實驗選擇1.5pmol為腺苷適體的最佳用量。2.1.3報告序列的用量考察了報告序列用量(20，30，40，60，80fmol)對CL信號值的影響，結(jié)果顯示，在10～60fmol時，CL信號隨報告序列用量的增加而急劇增加，60fmol時CL信號值達(dá)到最高值，之后隨著報告序列用量的增加，CL信號反而下降。這是由于適體量是固定的，當(dāng)報告序列的用量達(dá)到與適體結(jié)合的飽和點后，過多的報告序列反而會影響適體與報告序列的結(jié)合，導(dǎo)致CL信號值下降，故實驗

頡?氨基修飾的適體、報告序列以及抗地高辛－ALP的量對CL信號的影響。圖1腺苷的化學(xué)發(fā)光檢測示意圖Fig.1Schematicpresentationofadenosinechemiluminescentanalyticalprotocol2.1.1羧基磁性微球的用量考察了羧基磁性微球用量(20，30，40，50，60，，80μg)對CL信號值的影響。結(jié)果顯示，羧基磁性微球用量為40μg時，CL信號值最大，之后信號隨其用量的增加反而下降，這是由于過量的磁性微球雖然為氨基適體增加了連接位點，但磁性微球量的增多對發(fā)光信號有吸收，反而使CL信號值降低，故實驗選擇40μg為羧基磁性微球的最佳用量。圖2氨基修飾的腺苷適體量的優(yōu)化選擇(n=3)Fig.2Optimalselectionofamountofaminomodifiedadenosineaptamer(n=3)2.1.2腺苷適體的用量考察了不同的氨基修飾腺苷適體用量(1.0，1.5，3.0，8.0，10pmol)對CL信號值的影響，結(jié)果如圖2所示。當(dāng)腺苷適體用量為1.5pmol時，CL信號值最大，之后隨其用量增加反而下降，這是由于隨著氨基適體量的增加，羧基磁性微球上連接的適體也增多，增大了空間位阻，導(dǎo)致結(jié)合的報告序列量減少，降低了CL信號值，故實驗選擇1.5pmol為腺苷適體的最佳用量。2.1.3報告序列的用量考察了報告序列用量(20，30，40，60，80fmol)對CL信號值的影響，結(jié)果顯示，在10～60fmol時，CL信號隨報告序列用量的增加而急劇增加，60fmol時CL信號值達(dá)到最高值，之后隨著報告序列用量的增加，CL信號反而下降。這是由于適體量是固定的，當(dāng)報告序列的用量達(dá)到與適體結(jié)合的飽和點后，過多的報告序列反而會影響適體與報告序列的結(jié)合，導(dǎo)致CL信號值下降，故實驗選擇60fmol為報告序列的最佳用量。2.1.4抗地高辛－ALP酶的稀釋倍數(shù)考察了不同稀釋倍數(shù)的抗地高辛－ALP酶的用量(1∶3000～1∶12000)對CL信號值的影響，結(jié)果顯示

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