發(fā)布時(shí)間：2024-04-15 00:58

　　建立高效液相色譜-四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜(high performance liquid chromatography-time of flight mass spectrometry, HPLC-Q-TOF MS)方法進(jìn)行初產(chǎn)瘤牛下丘腦多肽組學(xué)研究。試驗(yàn)分2組,即熱穩(wěn)定處理組及對(duì)照組,分別取經(jīng)過(guò)熱穩(wěn)定儀處理和未經(jīng)處理的凍存腦組織分離下丘腦,進(jìn)行組織勻漿、重懸、超濾,獲得分子量小于10 kDa的多肽組分。多肽混合物經(jīng)NanoHPLC進(jìn)一步分離后進(jìn)行Q-TOF MS/MS分析,獲得的MS/MS質(zhì)譜圖經(jīng)ProteinPilot^TM數(shù)據(jù)庫(kù)搜索軟件對(duì)Precursor、Peptide、Uniprot及ibiss 4種數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行搜索比對(duì)。結(jié)果:通過(guò)搜索Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù),樣品穩(wěn)定處理組34個(gè)蛋白質(zhì)中有14個(gè)鑒定為神經(jīng)肽編碼前體蛋白,而在對(duì)照組56個(gè)蛋白質(zhì)中僅有8個(gè)被鑒定為神經(jīng)肽編碼前體蛋白。對(duì)上述4種數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行搜索比對(duì),共鑒定得到121種多肽。結(jié)論:經(jīng)熱穩(wěn)定處理后的樣品可有效減少蛋白質(zhì)降解,從而提高低豐度內(nèi)源性多肽的鑒定率;結(jié)合nanoHPLC-Q-TOF-MS/MS分析...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑與儀器
    1.2 試驗(yàn)分組與樣品采集
    1.3 多肽提取
    1.4 LC-MS分析
        1.4.1 色譜條件
        1.4.2 質(zhì)譜條件
    1.5 多肽鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 樣品穩(wěn)定性對(duì)多肽鑒定的影響
    2.2 初產(chǎn)泌乳牛下丘腦多肽組數(shù)據(jù)庫(kù)的建立
3 討論
    3.1 熱穩(wěn)定處理
    3.2 數(shù)據(jù)庫(kù)及數(shù)據(jù)庫(kù)搜索工具的選擇
    3.3 下丘腦多肽的鑒定
4 結(jié)論



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