生物途徑合成的甘油三酯（TAG）是重要的生物能源前體。酰基-�；d體蛋白（acyl-ACP）作為其合成途徑中的重要底物,與甘油三磷酸（G-3-P）在甘油三磷酸�；D(zhuǎn)移酶（GPAT）的催化下生成的溶血磷脂酸（LPA）是TAG合成路徑中第一個(gè)反應(yīng),對(duì)于TAG的合成起著重要的調(diào)控作用。因此對(duì)于acyl-ACP與GPAT的反應(yīng)研究具有重要意義。在ACP作為acyl-ACP底物的部分參與到GPAT催化�；D(zhuǎn)移反應(yīng)時(shí),通常僅視為酰基鏈為GPAT的催化選擇性,而忽略了ACP在其中的貢獻(xiàn),這種選擇機(jī)制的誤解存在于很多催化ACP反應(yīng)的酶中。因此為了能夠研究acyl-ACP的ACP部分對(duì)GPAT的選擇性貢獻(xiàn),獲得不同鏈長acyl-ACP及其突變體,并對(duì)其與GPAT的反應(yīng)活性進(jìn)行分析研究是深入了解ACP的結(jié)構(gòu)和功能,并認(rèn)識(shí)ACP參與酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)分子機(jī)制的重要前提。本研究根據(jù)野生型ACP的氨基酸序列及三維結(jié)構(gòu)信息,設(shè)計(jì)了涉及11個(gè)氨基酸位點(diǎn)共12株ACP突變體。體外構(gòu)建12株ACP突變體的表達(dá)質(zhì)粒并在大腸桿菌中可溶表達(dá)。在acyl-ACP合成酶的作用下將結(jié)合了4’-磷酸泛酰巰基乙胺基團(tuán)（4’-PPT）的活性A... 

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 微藻與生物柴油
        1.1.1 微藻的介紹
        1.1.2 生物柴油的概念
        1.1.3 微藻生物柴油的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)
        1.1.4 微藻生物柴油的機(jī)遇
    1.2 甘油三酯的合成
        1.2.1 脂肪酸合成途徑
        1.2.2 TAG合成途徑
    1.3 �；d體蛋白概述
        1.3.1 �；d體蛋白的研究概況
        1.3.2 ACP的結(jié)構(gòu)研究
    1.4 酰基載體蛋白的工業(yè)應(yīng)用
    1.5 甘油-3-磷酸�；D(zhuǎn)移酶的概述
    1.6 acyl-ACP與 GPAT相互作用研究進(jìn)展
    1.7 本論文的研究內(nèi)容和研究思路
    1.8 本論文立題目的和意義
2 不同acyl-ACP突變體的制備
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 主要儀器
        2.2.2 主要實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.3 培養(yǎng)基
        2.2.4 主要溶液
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 感受態(tài)細(xì)胞的制備
        2.3.2 熱激法轉(zhuǎn)化質(zhì)粒
        2.3.3 ACP突變體的設(shè)計(jì)及構(gòu)建
        2.3.4 holo-ACP不同突變體的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.5 holo-ACP的純化
        2.3.6 acyl-ACP合成酶AasS的表達(dá)純化
        2.3.7 不同鏈長acyl-ACP及其突變體的合成
        2.3.8 SDS-PAGE檢測(cè)重組蛋白表達(dá)純化
        2.3.9 Bradford法測(cè)定蛋白濃度
        2.3.10 HPLC定量檢測(cè)holo-ACP、acyl-ACP含量
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 holo-ACP突變體表達(dá)純化性質(zhì)差異
        2.4.2 HPLC檢測(cè)分析acyl-ACP性質(zhì)差異
        2.4.3 acyl-ACP的穩(wěn)定性差異
    2.5 小結(jié)
3 不同鏈長acyl-ACP及其突變體與GPAT的酶活測(cè)定
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 主要儀器
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.3 主要溶液
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 LiGPAT的誘導(dǎo)表達(dá)
        3.3.2 LiGPAT純化
        3.3.3 acyl-ACP與 Li GPAT的酶活測(cè)定
        3.3.4 HPLC檢測(cè)GPAT與 acyl-ACP的活性
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 16 :0-ACP突變體酶活測(cè)定反應(yīng)特性比較
        3.4.2 18 :1-ACP突變體酶活測(cè)定反應(yīng)特性比較
        3.4.3 LiGAPT對(duì)酰基鏈長的選擇性
    3.5 小結(jié)
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
附錄A 縮略語表及名稱說明
附錄B E.coli-ACP序列
附錄C ACP質(zhì)粒圖
附錄D Holo-ACP凝膠過濾色譜圖
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3661261