本文關鍵詞：“中文房間”論證及其哲學意蘊研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】皮膚惡性黑素瘤(cutaneousmalignantmelanoma,CMM)是一種高度惡性的皮膚腫瘤,致死率高,肢端黑素瘤是亞洲人種腫瘤的主要臨床亞型,而肢端黑素瘤中常存在c-KIT基因L576P和K642E等點突變位點,提示基因突變與腫瘤形成可能相關；另一方面,腫瘤位于肢端,提示其發(fā)生可能與肢端的缺氧微環(huán)境相關,而組織缺氧是腫瘤微環(huán)境基本特征之一,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關。(一)中國人群皮膚惡性肢端黑素瘤中c-KIT基因的表達及突變的分析我們采用免疫組織化學染色、PCR及基因測序等方法,從我院2010年1月-2013年6月期間診斷的中國人群黑素瘤患者的石蠟包埋組織中提取基因組DNA,并進行c-KIT基因第11、13、17號外顯子序列的擴增、測序。93例肢端CMM患者中檢測到4例患者出現(xiàn)c-KIT基因點突變,突變率為3.5%；免疫組化分析顯示93例肢端CMM中,c-kit蛋白陽性表達為84例(90.3%),22例非肢端CMM中,c-kit蛋白陽性表達為18例(81.8%)；在原位、侵襲性、近端轉移性肢端CMM組織中,c-kit蛋白表達水平與腫瘤的各項臨床病理特征均未見明顯相關(P值均>0.05)。(二)缺氧誘導因子-1α在惡性肢端黑素瘤中的表達及其與SCF/c-kit途徑的聯(lián)系我們應用免疫組織化學染色法檢測HIF-1α蛋白在肢端CMM,非肢端CMM及肢端黑素細胞痣的表達,并用正常肢端皮膚作對照,分析蛋白表達情況與臨床病理特征之間的相關性,結果顯示HIF-1α蛋白在肢端CMM中呈高表達,且與腫瘤的分期、進展、侵襲性均呈正相關。同時檢測c-kit在肢端CMM中的表達情況,分析其與HIF-1α的關系,二者呈協(xié)同表達,提示HIF-1α與SCF/c-kit途徑可能共同參與肢端CMM的發(fā)病機制。(三)構建穩(wěn)定表達c-KIT野生型和突變型基因的黑素瘤細胞株構建含有野生型c-KIT基因,L576P及K642Ec-KIT突變基因的慢病毒載體,進行A375人黑素瘤細胞的感染,成功構建A375-WT(含野生型c-KIT基因),A375-L576P、A375-K642E(含點突變c-KIT基因)的三組人黑素瘤細胞株,提供了較好的體外實驗模型。結論研究結果顯示所研究的中國人群中肢端黑素瘤c-KIT基因突變頻率較低,突變類型均為常見的L576P、K642E兩型。HIF-1α蛋白在肢端CMM中呈高表達,且與c-kit在惡性肢端黑素瘤中呈協(xié)同表達,提示HIF-1α與SCF/c-kit途徑可能共同參與肢端CMM的發(fā)病機制；我們構建了穩(wěn)定過表達c-KIT野生型和突變型基因的黑素瘤細胞株,為進一步研究黑素瘤中c-KIT基因突變、缺氧及其與SCF/c-kit途徑的聯(lián)系提供了良好的體外實驗模型打下了基礎。
【作者】周璐；
【導師】孫建方；
【作者基本信息】北京協(xié)和醫(yī)學院，皮膚病與性病學，2014，，博士
【關鍵詞】黑素瘤細胞；SCF/c-kit；肢端；腫瘤血管生成；侵襲性；melanoma；惡性黑素瘤；α蛋白；中國醫(yī)學科學院；野生型；

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