本文關(guān)鍵詞：苜蓿夜蛾絲氨酸蛋白酶基因cDNA序列的克隆與原核表達(dá)研究

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【摘要】：【目的】絲氨酸蛋白酶(Serine protease,SP)是以絲氨酸為活性中心的重要的蛋白水解酶。在昆蟲(chóng)中,絲氨酸蛋白酶參與消化、發(fā)育、先天免疫反應(yīng)和組織重建等重要的生理過(guò)程。本試驗(yàn)以苜蓿夜蛾Heliothis viriplaca為材料,克隆其絲氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,再對(duì)該基因進(jìn)行原核表達(dá)并對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行活性測(cè)定研究�！痉椒ā繌能俎Ｒ苟曛心c中提取總RNA,通過(guò)RT-PCR和RACE技術(shù),擴(kuò)增獲得絲氨酸蛋白酶基因cDNA全長(zhǎng)序列,用大腸桿菌E.coli表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá);再對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行變性、純化與復(fù)性,并以BTEE為底物進(jìn)行活性測(cè)定�！窘Y(jié)果】克隆得到的苜蓿夜蛾中腸絲氨酸蛋白酶基因命名為Hv SP,該基因已登錄Gen Bank,登錄號(hào)為KT907053。該基因全長(zhǎng)1 017 bp,開(kāi)放閱讀框?yàn)?86 bp,編碼295個(gè)氨基酸,分子量約為30.8 ku,等電點(diǎn)為8.27,推導(dǎo)的氨基酸序列與其他昆蟲(chóng)絲氨酸蛋白酶氨基酸序列相似性在46%~92%之間。在Tris-HCl緩沖液中,p H為8.5時(shí),復(fù)性的重組蛋白活性最高,為28.7 U/m L。熒光定量PCR結(jié)果表明,Hv SP基因的m RNA在苜蓿夜蛾的多個(gè)組織中特異性表達(dá),且在中腸中表達(dá)量最高,但在唾腺中未檢測(cè)到Hv SP的m RNA表達(dá)�！窘Y(jié)論】該研究克隆了一個(gè)新的苜蓿夜蛾絲氨酸蛋白酶基因的cDNA序列,且原核表達(dá)后的重組蛋白經(jīng)過(guò)變性、純化及復(fù)性后具有活性,為進(jìn)一步探索絲氨酸蛋白酶在昆蟲(chóng)體內(nèi)的生理生化功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 苜蓿夜蛾 絲氨酸蛋白酶 克隆 原核表達(dá) 酶活性
【基金】：國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)基金CARS-04
【分類號(hào)】：S433.4
【正文快照】： **第一作者First author,E-mail:leelily201@163.com***通訊作者Corresponding author,E-mail:dnfd@163.com絲氨酸蛋白酶(Serine protease,SP)超家族是一類在C端具有特異性保守催化三聯(lián)體(His、Asp、Ser)結(jié)構(gòu)域的蛋白水解酶,廣泛存在于生物有機(jī)體中(Ross et al.,2003)。該家族

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 慕衛(wèi),吳孔明,梁革梅,張文吉;苜蓿夜蛾人工飼養(yǎng)技術(shù)[J];農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào);2002年01期

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本文編號(hào)：874322