野油菜黃單胞菌野油菜致病變種(Xanthomonas campestris pv campestris, Xcc)是十字花科植物黑腐病(black rot disease)的病原菌。Xcc通過(guò)Ⅲ型分泌系統(tǒng)將大量的效應(yīng)蛋白分泌到宿主細(xì)胞內(nèi),從而抑制宿主的先天免疫。AvrXccE1是Xcc的一個(gè)效應(yīng)蛋白,并且它的同源蛋白廣泛存在于黃單胞菌中。 本研究利用三親結(jié)合法敲除avrXccE1基因,獲得突變體Xcc8004△avrXccE1,并用競(jìng)爭(zhēng)指數(shù)分析法測(cè)定突變體在擬南芥上的毒性。結(jié)果顯示效應(yīng)蛋白AvrXccEl對(duì)于Xcc8004在擬南芥上的全毒性是必須的。細(xì)菌的鞭毛蛋白能夠被植物的模式識(shí)別受體FLS2識(shí)別,同時(shí)誘導(dǎo)FRK1::LUC基因(PAMP-responsive reporter gene)的表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)在擬南芥原生質(zhì)體中,AvrXccEl可以抑制病原細(xì)菌鞭毛蛋白flg22誘導(dǎo)的FRKl基因表達(dá),但并不抑制flg22誘導(dǎo)的MAP激酶活性。推測(cè)效應(yīng)蛋白AvrXccE1抑制的PTI信號(hào)通路是不依賴于MAPKs。 通過(guò)共聚焦顯微鏡觀察AvrXccE1與GFP的融合蛋白,結(jié)果顯示效應(yīng)蛋白Av...

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 引言
    1 野油菜黃單胞菌概述
    2 黃單胞菌致病因子
    3 黃單胞菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)及效應(yīng)蛋白研究進(jìn)展
        3.1 Ⅲ型分泌系統(tǒng)
            3.1.1 細(xì)菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)組成
        3.2 黃單胞效應(yīng)蛋白的研究進(jìn)展
    4 植物先天免疫
        4.1 PAMPs激活的抗病反應(yīng)
        4.2 效應(yīng)蛋白激活的免疫反應(yīng)
    5 寄主植物和病原細(xì)菌的共進(jìn)化
    6 本文的研究目的和意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 質(zhì)粒與菌株
            1.1.1 質(zhì)粒
            1.1.2 菌株
        1.2 植物材料
        1.3 藥品和試劑
            1.3.1 培養(yǎng)基
            1.3.2 分子克隆相關(guān)試劑
            1.3.3 蛋白相關(guān)試劑
            1.3.4 Western blot相關(guān)試劑配制
            1.3.5 試劑盒
            1.3.6 擬南芥原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化用試劑
        1.4 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 載體構(gòu)建
        2.2 Xcc8004基因組DNA提取
        2.3 質(zhì)粒小量提取
        2.4 avrXccE1基因敲除與互補(bǔ)
        2.5 植物培養(yǎng)與接種
        2.6 質(zhì)粒的大量提取
        2.7 擬南芥原生質(zhì)體制備、轉(zhuǎn)化和蛋白提取
        2.8 熒光素酶雙報(bào)告系統(tǒng)分析
        2.9 MAPK激酶活性分析
        2.10 Western雜交
        2.11 共聚焦顯微鏡觀察
第三章 野油菜黃單胞菌效應(yīng)蛋白AvrXccEl致病機(jī)理研究
    1 結(jié)果與分析
        1.1 avrXccE1基因的敲除
        1.2 AvrXccE1對(duì)于Xcc8004在擬南芥上的全毒性是必須的
        1.3 效應(yīng)蛋白AvrXccE1在擬南芥原生質(zhì)體中抑制flg22誘導(dǎo)的基因表達(dá)
        1.4 效應(yīng)蛋白AvrXccE1不抑制flg22誘導(dǎo)的MAPK激酶活性
        1.5 AvrXccE1定位于細(xì)胞膜
        1.6 肉蔻乙酰化位點(diǎn)對(duì)于AvrXccE1的毒性和無(wú)毒功能是必須的
    2 討論
    3 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
縮略語(yǔ)表
附錄1 實(shí)驗(yàn)所用載體圖
附錄2 實(shí)驗(yàn)所用引物
附錄3 碩士期間發(fā)表的文章
致謝



本文編號(hào)：3951337