作為普遍使用的氨基甲酸酯類殺蟲劑-西維因,由于地表徑流和不規(guī)范使用,致使其廣泛的殘留與分布,威脅到生物體的生長發(fā)育與生態(tài)環(huán)境的平衡,造成的不良影響已不可忽視。西維因具有一定遺傳毒性和雌激素效應。內分泌干擾效應的作用機制分為受體介導和非受體介導。受體介導作用是指外源性雌激素通過模仿或拮抗內源性激素,與內源性激素受體結合,引發(fā)生物學反應干擾機體正常內分泌系統(tǒng)。非受體介導作用是指西維因通過影響內分泌激素的合成、運輸、轉化和代謝等過程干擾機體的內分泌系統(tǒng)。本試驗以雄性尼羅羅非魚為研究對象,探討不同濃度下西維因的暴露對羅非魚血清中內分泌相關激素水平、組織的DNA損傷以及內分泌激素合成途徑中相關基因表達水平的影響,為分析和評價西維因的內分泌干擾效應的非受體介導作用機制和遺傳毒性提供科學依據。羅非魚暴露于不同劑量下的西維因(0.16mg/L、0.8mg/L、2mg/L)為期29天,酶聯(lián)免疫法測定血清中黃體生成素(LH),卵泡刺激素(FSH),三碘甲狀腺原氨酸(T3),甲狀腺素(T4),雌二醇(E2)、睪酮(T)、卵黃蛋白原(VTG)、皮質醇(COR)水平,結果顯示：0.8mg/L劑量組各激素水平隨暴...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號及縮略語說明
第一章 綜述
    1 引言
    2 西維因概述
        2.1 西維因的性質及來源
        2.2 西維因的毒性
    3 環(huán)境內分泌污染物的干擾效應
    4 西維因的環(huán)境內分泌干擾效應
    5 西維因內分泌干擾效應的非受體介導作用機制
        5.1 環(huán)境內分泌干擾效應的兩種作用機制
        5.2 類固醇激素的合成途徑
        5.3 西維因對類固醇激素合成途徑的影響
    6 單細胞凝膠電泳(SCGE)概述
    7 本課題的立題依據及研究內容
第二章 西維因暴露對羅非魚內分泌相關酶活性的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料與試劑
        2.2 實驗儀器
        2.3 實驗設計
        2.4 ELISA法測定內分泌相關酶活性
            2.4.1 血清中黃體生成素(LH)水平和卵泡刺激素(FSH)水平的測定
            2.4.2 血清中三碘甲狀腺原氨酸(T3)水平和甲狀腺激素(T4)水平的測定
            2.4.3 血清中雌二醇(E2)水平和睪酮(T)水平的測定
            2.4.4 血清中卵黃蛋白原(VTG)水平和皮質醇(COR)水平的測定
        2.5 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 LH和FSH水平變化趨勢
        3.2 T3和T4水平變化趨勢
        3.3 E2和T水平變化趨勢
        3.4 VTG和COR水平變化趨勢
    4 討論
        4.1 西維因暴露與下丘腦-垂體-性腺軸相關酶水平變化的相關性
        4.2 西維因暴露與下丘腦-垂體-甲狀腺軸相關酶水平變化的相關性
    5 小結
第三章 西維因對羅非魚內分泌相關基因表達的影響
    前言
    第一節(jié) 西維因暴露對羅非魚性腺組織中相關基因的表達影響
        1 材料與方法
            1.1 實驗材料與試劑
            1.2 實驗儀器
            1.3 實驗設計
            1.4 實驗方法
                1.4.1 樣品采集
                1.4.2 總RNA提取
                1.4.3 RNA濃度與完整性的檢測
                1.4.4 反轉錄
                1.4.5 引物設計
            1.5 實時熒光定量PCR
                1.5.1 RT-PCR的反應條件
                1.5.2 RT-PCR的計算法則
            1.6 統(tǒng)計分析
        2 結果與分析
            2.1 RT-PCR檢測羅非魚精巢組織中3β-HSD1的表達
            2.2 RT-PCR檢測羅非魚精巢組織中11β-HSD2的表達
            2.3 RT-PCR檢測羅非魚精巢組織中17β-HSD8的表達
            2.4 RT-PCR檢測羅非魚精巢組織中20β-HSD的表達
            2.5 RT-PCR檢測羅非魚精巢組織中CYP19a的表達
            2.6 RT-PCR檢測羅非魚精巢組織中CYP19b的表達
        3 討論
    第二節(jié) 西維因暴露對羅非魚肝臟組織中相關基因表達的影響
        1 材料與方法
        2 結果與分析
            2.1 RT-PCR檢測羅非魚肝臟組織中3β-HSD1的表達
            2.2 RT-PCR檢測羅非魚肝臟組織中11β-HSD2的表達
            2.3 RT-PCR檢測羅非魚肝臟組織中17β-HSD8的表達
            2.4 RT-PCR檢測羅非魚肝臟組織中20β-HSD的表達
            2.5 RT-PCR檢測羅非魚肝臟組織中CYP19a的表達
        3 討論
        4 小結
第四章 西維因對羅非魚精巢細胞DNA損傷的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料與試劑
        2.2 實驗儀器
        2.3 實驗設計
        2.4 彗星試驗
            2.4.1 制備單細胞懸浮液
            2.4.2 制片
            2.4.3 細胞裂解
            2.4.4 DNA解旋
            2.4.5 電泳
            2.4.6 中和
            2.4.7 固定
            2.4.8 染色
        2.5 統(tǒng)計分析
    3 結果與分析
        3.1 精巢細胞DNA受損狀況
        3.2 西維因對精巢細胞DNA的損傷作用
    4 討論
    5 小結
全文結論
參考文獻
致謝
科研情況



本文編號：3807207