發(fā)布時間：2022-12-25 15:11

　　小菜蛾Plutella xylostella L屬鱗翅目菜蛾科,作為世界性分布的十字花科蔬菜主要害蟲,也是抗藥性產生最快和最強的農業(yè)害蟲之一。自1953年小菜蛾被報道成為世界上第一個對DDT產生抗性的作物害蟲以來,已對多種殺蟲劑產生抗性,其中以對擬除蟲菊酯類殺蟲劑的抗性發(fā)展最快。小菜蛾抗藥性的產生和不斷增強帶來一系列的危害,農業(yè)減產、環(huán)境污染、傷害天敵、甚至危害人類的健康和生態(tài)平衡。因此,小菜蛾抗性機理方面的研究刻不容緩。 溴氰菊酯（deltamethrin, DM）是人工合成擬除蟲菊酯殺蟲劑中殺蟲毒力最強的品種之一,對哺乳動物安全,具有廣譜、低殘留的特點,在生產實踐中得到了廣泛應用。我們前期的研究發(fā)現,小菜蛾溴氰菊酯敏感品系和抗性品系成蟲期的蛋白質雙向電泳圖譜存在顯著差異。但是,小菜蛾的主要危害是在幼蟲期,而且同一蛋白在不同生理階段表達水平也有很大差異,因此分析幼蟲在溴氰菊酯脅迫下蛋白質表達譜的變化,不僅有助于闡述抗性機理,分析交互抗性,還有望篩選出殺蟲劑的分子靶標。本文在前期工作的基礎上,采用雙向電泳和質譜技術對小菜蛾幼蟲體內差異表達的蛋白質進行分離和鑒定,通過基因轉染技術進... 

【文章頁數】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 小菜蛾抗性發(fā)展現狀
    1.2 小菜蛾對農藥抗性的研究
        1.2.1 有機磷類
        1.2.2 擬除蟲菊酯類
        1.2.3 氨基甲酸酯類
        1.2.4 沙蠶毒素類
        1.2.5 抗生素阿維菌素類
        1.2.6 蘇云金桿菌類
    1.3 小菜蛾的抗藥性機制
        1.3.1 解毒酶活性增加
        1.3.2 靶標敏感度降低
    1.4 蛋白質組學研究
        1.4.1 蛋白質組學研究策略
        1.4.2 蛋白質組學技術
            1.4.2.1 蛋白質分離技術
            1.4.2.2 蛋白質鑒定技術
        1.4.3 蛋白質組學在昆蟲抗藥性方面的研究
    1.5 基因轉染技術
第2章 小菜蛾幼蟲體內差異表達蛋白的分離與鑒定
    2.1 實驗材料
        2.1.1 供試小菜蛾
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 試劑配制
        2.2.2 蛋白樣品制備
            2.2.2.1 小菜蛾幼蟲總蛋白的提取
            2.2.2.2 蛋白標準曲線的制備和濃度檢測
        2.2.3 雙向電泳
            2.2.3.1 第一向等電聚焦(IEF)
            2.2.3.2 第二向SDS-PAGE電泳
        2.2.4 圖像采集與分析
            2.2.4.1 銀染
            2.2.4.2 凝膠掃描與圖像分析
        2.2.5 質譜鑒定
            2.2.5.1 取點
            2.2.5.2 膠內酶解
            2.2.5.3 MALDI-TOF-TOF 質譜
    2.3 實驗結果
        2.3.1 蛋白質樣品的濃度測定
        2.3.2 小菜蛾幼蟲的雙向電泳圖譜
        2.3.3 差異蛋白點的質譜鑒定結果
    2.4 討論
        2.4.1 雙向電泳圖譜分析
        2.4.2 質譜鑒定結果分析
第3章 應用qRT-PCR技術驗證小菜蛾幼蟲體內差異蛋白質的表達
    3.1 實驗材料
        3.1.1 供試小菜蛾
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 提取小菜蛾幼蟲總RNA
        3.2.2 檢測RNA的濃度和純度
        3.2.3 合成cDNA
        3.2.4 實時熒光定量PCR
        3.2.5 數據統(tǒng)計與分析
    3.3 結果
        3.3.1 RNA樣品的測定
        3.3.2 qRT-PCR檢測結果
        3.3.3 差異點蛋白的表達分析
    3.4 討論
第4章 TCTP過表達對Kc細胞溴氰菊酯敏感性的影響
    4.1 實驗材料
        4.1.1 供試小菜蛾
        4.1.2 果蠅Kc細胞
        4.1.3 主要試劑和儀器
        4.1.4 主要儀器
    4.2 實驗方法
        4.2.1 TCTP目的基因的制備
            4.2.1.1 提取小菜蛾幼蟲總RNA
            4.2.1.2 合成cDNA
            4.2.1.3 PCR擴增目的基因片段
        4.2.2 構建重組質粒
            4.2.2.1 PCR產物純化
            4.2.2.2 構建pIB-TCTP重組質粒
            4.2.2.3 鑒定重組質粒
        4.2.3 瞬時轉染Kc細胞
            4.2.3.1 抽提質粒
            4.2.3.2 Kc細胞接種6孔板
            4.2.3.3 轉染Kc細胞
        4.2.4 實時熒光定量PCR檢測目的基因表達
            4.2.4.1 提取細胞RNA
            4.2.4.2 逆轉錄合成cDNA
            4.2.4.3 實時熒光定量PCR
        4.2.5 細胞毒性檢測
    4.3 實驗結果
        4.3.1 PCR擴增目的基因
        4.3.2 重組質粒pIB-TCTP的鑒定
        4.3.3 TCTP基因的表達分析
        4.3.4 細胞活力分析
    4.4 討論
第5章 總結
參考文獻
在讀學位期間的研究成果及發(fā)表的學術論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3726853