隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的快速發(fā)展，轉(zhuǎn)基因作物的種類和數(shù)量也急劇增加。由于越來越多的外源插入元件被轉(zhuǎn)入的作物中，直接檢測(cè)某種插入元件或特異性轉(zhuǎn)化事件變得費(fèi)時(shí)、費(fèi)力并且成本較高。所以國(guó)外許多轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)機(jī)構(gòu)逐步建立轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的快速篩選技術(shù)，并與矩陣方法相結(jié)合大大提高了轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)效率，這種快速篩選技術(shù)在我國(guó)還沒有相關(guān)的報(bào)道。由于不同國(guó)家對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的管理存在差異，所以這種快速篩選檢測(cè)技術(shù)的方法以及所選用的篩選元件也不盡相同。本研究依據(jù)我國(guó)進(jìn)出口轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的外源基因、調(diào)控元件、標(biāo)記基因和T-DNA通用序列信息建立了適合國(guó)內(nèi)的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品快速檢測(cè)的方法。主要研究如下： 1、pCaMV35S和tNOS在轉(zhuǎn)基因生物及其制品檢測(cè)中的適用性研究：pCaMV35S和tNOS是轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品篩選檢測(cè)中的首選參數(shù)，日常檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，個(gè)別標(biāo)準(zhǔn)中的引物存在非特異性擴(kuò)增和靈敏度差的問題。本實(shí)驗(yàn)收集了國(guó)內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)中常用的擴(kuò)增片段分別為195bp、165bp、147bp、123bp的pCaMV35S和擴(kuò)增片段分別為180bp、172bp、165bp、118bp的tNOS各四對(duì)引物，應(yīng)用普通PCR和實(shí)時(shí)熒光（Real-tim... 

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 全球轉(zhuǎn)基因作物的發(fā)展現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢(shì)
        1.1.1 全球轉(zhuǎn)基因作物發(fā)展現(xiàn)狀
        1.1.2 全球轉(zhuǎn)基因作物發(fā)展趨勢(shì)
    1.2 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)方法
        1.2.1 基于 DNA 序列的檢測(cè)方法
        1.2.2 基于表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)的檢測(cè)方法
        1.2.3 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)數(shù)據(jù)庫(kù)
        1.2.4 未授權(quán)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的檢測(cè)
    1.3 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全評(píng)價(jià)與管理
        1.3.1 主要國(guó)家對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全管理
        1.3.2 主要國(guó)國(guó)際組織對(duì)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全管理
    1.4 本論文的研究目的、意義和主要研究?jī)?nèi)容
        1.4.1 研究目的和意義
        1.4.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 PCAMV35S 和 TNOS 在轉(zhuǎn)基因生物及其制品檢測(cè)中的適用性研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 材料
        2.1.2 PCAMV35S 和 TNOS 基因擴(kuò)增引物各 4 對(duì)
        2.1.3 試劑
        2.1.4 主要儀器與設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 樣品的加工制備
        2.2.2 DNA 的提取
        2.2.3 PCR 擴(kuò)增
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 PCAMV35S 和 TNOS 引物的普通 PCR 特異性擴(kuò)增
        2.3.2 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 特異性擴(kuò)增
        2.3.3 PCAMV35S 和 TNOS 引物的靈敏度實(shí)驗(yàn)
        2.3.4 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 靈敏度實(shí)驗(yàn)
        2.3.5 加工品中 PCAMV35S 和 TNOS 引物的普通 PCR 測(cè)試
        2.3.6 加工品中 PCAMV35S 和 TNOS 引物的 REAL-TIME PCR 測(cè)試
    2.4 討論
        2.4.1 評(píng)價(jià)方法的選擇
        2.4.2 高質(zhì)量引物對(duì)篩選檢測(cè)的重要性
    2.5 結(jié)論
第三章 基于 SYBR GREEN I 同時(shí)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品 16 種元件的快速檢測(cè)技術(shù)的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 材料
        3.1.2 試劑
        3.1.3 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 DNA 提取
        3.2.2 基因組 DNA 濃度和純度的測(cè)定
        3.2.3 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè)元件序列的選擇
        3.2.4 實(shí)時(shí)熒光 PCR 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件
        3.2.5 特異性擴(kuò)增
        3.2.6 靈敏度實(shí)驗(yàn)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 特異性擴(kuò)增結(jié)果
        3.3.2 不同濃度 DNA 模板拷貝數(shù)計(jì)算
        3.3.3 靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.4 討論
第四章 基于轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻中 BT 基因和其他非預(yù)期基因表達(dá)的研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.1 水稻培養(yǎng)
        4.1.2 水稻 RNA 提取
        4.1.3 RNA 提取與純化
        4.1.4 CDNA 合成
        4.1.5 CDNA 測(cè)序
        4.1.6 差異表達(dá)基因分析
    4.2 結(jié)果分析
        4.2.1 CDNA 測(cè)序結(jié)果分析
        4.2.2 測(cè)序飽和度分析
        4.2.3 BT 基因表達(dá)量分析
        4.2.4 樣品的差異表達(dá)分析
        4.2.5 差異表達(dá)基因的 GO（GENE ONTOLOGY）功能分析
        4.2.6 GO 功能顯著性富集分析
        4.2.7 差異表達(dá)基因的 KEGG PATHWAY 分析
        4.2.8 差異表達(dá)基因的 KEGG PATHWAY 顯著性富集分析
    4.3 討論
全文結(jié)論
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3679224