標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是分析測(cè)試的“砝碼”,為檢測(cè)結(jié)果的可比性、有效性和可溯源性提供重要保障。在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)領(lǐng)域,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)于轉(zhuǎn)基因食品、飼料中轉(zhuǎn)基因成分及其含量的準(zhǔn)確分析至關(guān)重要,而標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究在此領(lǐng)域目前處于起步階段,定值、制備及測(cè)量不確定度評(píng)定等方面亟待提高與完善。本文以孟山都公司開(kāi)發(fā)的轉(zhuǎn)基因大豆MON87751為研究對(duì)象,圍繞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究領(lǐng)域的現(xiàn)存問(wèn)題,開(kāi)展如下三個(gè)方面研究:1.建立了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的雙重微滴式數(shù)字PCR（droplet digital PCR,ddPCR）的絕對(duì)定量方法。目前,MON87751大豆在國(guó)際上主要采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）進(jìn)行定量測(cè)量,尚無(wú)采用ddPCR進(jìn)行絕對(duì)定量分析的報(bào)道,且國(guó)內(nèi)也沒(méi)有該轉(zhuǎn)化體的檢測(cè)方法發(fā)布。針對(duì)此問(wèn)題,本研究基于ddPCR核酸絕對(duì)定量技術(shù)平臺(tái),建立了轉(zhuǎn)基因大豆MON87751雙重ddPCR方法。研究?jī)?nèi)容涵蓋了ddPCR的特異性、重復(fù)性、線(xiàn)性動(dòng)力學(xué)范圍、檢出限和定量限,以此確定了反應(yīng)體系和反應(yīng)條件。以10組10%的MON87751大豆樣品作為分析對(duì)象,結(jié)果表明重復(fù)性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.10%～0.71%之間。當(dāng)模板DNA濃度低至4 ... 

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 國(guó)內(nèi)外轉(zhuǎn)基因作物研究現(xiàn)狀
        1.1.1 國(guó)外轉(zhuǎn)基因作物的研究與種植現(xiàn)狀
        1.1.2 我國(guó)轉(zhuǎn)基因作物的研究與種植現(xiàn)狀
    1.2 轉(zhuǎn)基因作物及其產(chǎn)品的安全管理
        1.2.1 轉(zhuǎn)基因的安全性問(wèn)題
        1.2.2 國(guó)內(nèi)外轉(zhuǎn)基因生物及其產(chǎn)品的管理要求
    1.3 轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)方法
        1.3.1 蛋白質(zhì)水平上的檢測(cè)技術(shù)
        1.3.2 核酸水平上的檢測(cè)技術(shù)
    1.4 轉(zhuǎn)基因檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
        1.4.1 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定義
        1.4.2 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的分類(lèi)
        1.4.3 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的制備工藝
        1.4.4 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研究進(jìn)展
    1.5 本課題研究?jī)?nèi)容
    1.6 本課題研究目的及意義
第2章 微滴式數(shù)字PCR定量方法的建立
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 DNA提取方法
        2.2.2 反應(yīng)體系和反應(yīng)條件
        2.2.3 退火溫度
        2.2.4 檢測(cè)方法的特異性
        2.2.5 檢測(cè)方法的重復(fù)性
        2.2.6 檢測(cè)方法的線(xiàn)性動(dòng)力學(xué)范圍
        2.2.7 檢測(cè)方法的定量檢測(cè)限
    2.3 結(jié)果與討論
        2.3.1 引物探針的優(yōu)化
        2.3.2 退火溫度的優(yōu)化
        2.3.3 方法的特異性
        2.3.4 方法的重復(fù)性
        2.3.5 方法的線(xiàn)性動(dòng)力學(xué)范圍
        2.3.6 方法的檢測(cè)極限和定量極限
    2.4 本章小結(jié)
第3章 MON87751基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的研制
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 制備策略
        3.2.2 原材料鑒定
        3.2.3 原材料的處理
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.3.1 原材料的鑒定
        3.3.2 原材料的處理
        3.3.3 均勻性初檢
    3.4 本章小結(jié)
第4章 MON87751基體標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不確定度的評(píng)估
    4.1 實(shí)驗(yàn)方法
        4.1.1 均勻性檢測(cè)分析
        4.1.2 穩(wěn)定性檢測(cè)分析
    4.2 結(jié)果與討論
        4.2.1 均勻性檢驗(yàn)
        4.2.2 穩(wěn)定性檢驗(yàn)
        4.2.3 量值分析
        4.2.4 拷貝數(shù)定值分析
    4.3 本章小結(jié)
第5章 結(jié)論和展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]轉(zhuǎn)基因植物及產(chǎn)品核酸檢測(cè)新技術(shù)研究[D]. 郭金超.上海交通大學(xué) 2011

碩士論文
[1]七種轉(zhuǎn)基因水稻質(zhì)粒DNA標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研制[D]. 鄭蘭.上海交通大學(xué) 2017
[2]重組酶介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測(cè)中的應(yīng)用[D]. 徐潮.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2014
[3]轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品快速、高通量檢測(cè)方法研究[D]. 張苗.上海交通大學(xué) 2013
[4]轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)陽(yáng)性質(zhì)粒分子的研制及應(yīng)用[D]. 李俊.中南民族大學(xué) 2012
[5]利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗病番茄新品系[D]. 李瑋.山東師范大學(xué) 2010



本文編號(hào)：3647247