為篩選枯草芽孢桿菌EDR4拮抗相關(guān)基因,利用轉(zhuǎn)座子TnYLB-1構(gòu)建了該菌株的插入突變體庫。通過對種子液OD₆₀₀值、轉(zhuǎn)接培養(yǎng)液一繼續(xù)培養(yǎng)OD₆₀₀值及轉(zhuǎn)接培養(yǎng)液二后的孵育時間3個因素設(shè)計(jì)正交試驗(yàn),轉(zhuǎn)化過程中加入pMarA質(zhì)粒的不同量及質(zhì)粒與感受態(tài)細(xì)胞共培養(yǎng)的不同時間研究了兩種因素對轉(zhuǎn)化效率的影響,確定了pMarA對EDR4的轉(zhuǎn)化體系。通過50℃高溫誘導(dǎo)培養(yǎng)產(chǎn)生了EDR4的插入突變體,挑取單菌落2 756個,構(gòu)建了EDR4的插入突變體庫,隨機(jī)挑選14株突變體經(jīng)PCR檢測轉(zhuǎn)座子TnYLB-1序列,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子已成功插入到EDR4基因組中,進(jìn)一步通過Southern雜交驗(yàn)證,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子TnYLB-1主要以單拷貝形式隨機(jī)插入,也有部分多拷貝插入。以油菜菌核病菌為靶標(biāo)菌,從640株突變菌株中篩選出兩株抑菌活性明顯下降的突變株,分別為EDR4-T1272和EDR4-T1473,通過生物學(xué)特性觀察發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子的插入未對EDR4生物學(xué)特性產(chǎn)生影響,通過PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)座子序列發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)座子可以在突變體中穩(wěn)定遺傳。經(jīng)過反向PCR擴(kuò)增出EDR4-T1272、EDR4-T1... 

【文章來源】：中國植物病理學(xué)會2014年學(xué)術(shù)年會論文集中國植物病理學(xué)會會議論文集

【文章頁數(shù)】：1 頁


本文編號：3644275