植物內(nèi)生菌及根際微生物產(chǎn)生的功能性代謝產(chǎn)物能為宿主植物提供一定的營(yíng)養(yǎng),還可提高宿主的抗病性和抗逆性。實(shí)驗(yàn)材料“川草2號(hào)”老芒麥、“川西”肅草、“阿壩”垂穗披堿草是3種優(yōu)良新品種牧草。通過(guò)平板分離法,從3種牧草分離獲得根際微生物和內(nèi)生菌共173種,其中真菌22種、細(xì)菌151種。對(duì)各菌株進(jìn)行抗小麥赤霉病和促進(jìn)生長(zhǎng)功能評(píng)價(jià)結(jié)果表明,4株真菌及61株細(xì)菌可產(chǎn)生吲哚乙酸（IAA）,濃度范圍為0.02～14.75 mg/L,菌株P(guān)J81產(chǎn)量最高為14.75 mg/L;有8株真菌和93株細(xì)菌可產(chǎn)生赤霉素（GA₃）,濃度范圍為11.03～468.91 mg/L,其中PJ119產(chǎn)量最高為468.91mg/L;9株真菌及85株細(xì)菌可產(chǎn)鐵載體;有5株真菌和77株細(xì)菌能夠降解纖維素。不同菌株抑制病原菌效果存在差異,抑菌率范圍為:43.35%-82.76%。綜合分析分離各菌株能力表明,菌株P(guān)J22、PJ68、PJ73和PJ81均具上述的抗病和促生能力。真菌菌株中無(wú)同時(shí)具備促生及抗病能力的菌株,菌株P(guān)J161在真菌中產(chǎn)生IAA能力最強(qiáng),達(dá)8.76 mg/L,PJ112真菌產(chǎn)生GA_3... 

【文章來(lái)源】：西華師范大學(xué)四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線

第二章材料與方法9第二章材料與方法2.1試驗(yàn)材料2.1.1樣品采集材料“川草2號(hào)”老芒麥，“阿壩”垂穗披堿草和“川西”肅草來(lái)自四川省阿壩藏族羌族自治州紅原縣（如圖2-1），由四川省草原科學(xué)研究院提供（海拔3472m）。樣品采集方式采取連根拔起的方式。樣品采集地點(diǎn)的海拔高度及經(jīng)緯度如表2-1所示。圖2-1材料采集點(diǎn)Figure.2-1Collectionpointsofplantmaterialsusedinthisstudy表2-1牧草樣品采集地點(diǎn)Table.2-1Thelocationofthesamplingpoints牧草海拔/m經(jīng)度/E緯度/N“川草2號(hào)”老芒麥3475102.5453°32.7775°“川西”肅草3470102.5454°32.7776°“阿壩”垂穗披堿草3472102.5456°32.7776°2.1.2實(shí)驗(yàn)主要試劑本實(shí)驗(yàn)主要采用蛋白胨、NaCl、瓊脂粉、葡萄糖、酵母膏、牛肉膏、酪蛋白、胰蛋白胨、MgSO4·7H2O、麥芽浸膏、萘啶酮酸、放線菌酮、鉻天青、FeCl3、Na2HPO4、KH2PO4、NH4Cl、哌嗪二乙磺酸等試劑。

塊CAS檢測(cè)培養(yǎng)基上點(diǎn)種菌餅，重復(fù)3次。分別置于30℃下恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)細(xì)菌3d；28℃下培養(yǎng)真菌7d。菌落周圍穿線黃色暈圈為陽(yáng)性，無(wú)黃色暈圈則為陰性，測(cè)定并記錄水解圈大校2.2.5微生物抑菌效果采用平板對(duì)峙培養(yǎng)[123]。菌株培養(yǎng)及菌餅制備參照2.2.4.3），將菌餅（6mm）接種到中部接種了赤霉病病原菌菌餅(6mm)且培養(yǎng)了的PDA培養(yǎng)基（80mm）。進(jìn)行對(duì)峙培養(yǎng)7d。以未加細(xì)菌的的接種了赤霉病原菌的培養(yǎng)基作為空白對(duì)照。對(duì)有抑菌效果的細(xì)菌測(cè)定其抑菌效果，抑菌效率=（對(duì)照組病原菌直徑-實(shí)驗(yàn)組病原菌直徑）/對(duì)照組病原菌直徑。圖2-2離體拮抗實(shí)驗(yàn)Figure.2-2Thediagramofantagonisticinvitro2.2.6目標(biāo)菌株系統(tǒng)發(fā)育地位分析2.2.6.1細(xì)菌DNA提取取3mL培養(yǎng)菌液，10000xg離心2min。倒掉上清液，加入180μLTE緩沖液，18μL50mg/mL溶菌酶、5μLRNA酶（20mg/L），30℃水浴30min。5000xg離心5min，取10μL上清液。加入25mgGlassBeads和200μLBufferTL，渦旋5min，靜置，取上清至1.5mL離心管。加25uL蛋白酶K，渦旋10s，瞬時(shí)離心。50℃水浴30min，每隔3min渦旋一次。10000xg離心2min，取上清至新離心管。加220uLBufferBL，混勻后于65℃水浴10min。加入220μL無(wú)水乙醇，渦旋20s。轉(zhuǎn)移混合液于吸附柱，10000xg離心1min。將吸附柱放入另一收集管，加500μLBufferKB，10000xg離心1min，倒掉廢液。加入650μLDNAWashBuffer，10000xg離心1min，倒掉廢液。加450μLDNAWashBuffer，

【參考文獻(xiàn)】：
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博士論文
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碩士論文
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[3]不同植物根際促生菌對(duì)小麥、水稻、棉花的促生效果評(píng)價(jià)[D]. 李冰.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：3575841