植物致病真菌是造成主要糧食和經(jīng)濟(jì)作物減產(chǎn)的頭號(hào)殺手,目前大量使用的化學(xué)農(nóng)藥已經(jīng)對(duì)環(huán)境和人類健康造成了巨大的負(fù)面影響。同時(shí)開發(fā)新型化學(xué)農(nóng)藥的高成本及耐藥微生物的迅速出現(xiàn)等因素,引起我們對(duì)生物農(nóng)藥的關(guān)注。其中,抗真菌蛋白因其來(lái)源廣泛及其獨(dú)特的作用機(jī)制,為新型抗真菌活性物質(zhì)的研究提供了重要信息,并成為了研究熱點(diǎn)。此外,陸地生物資源已被大量開發(fā),發(fā)現(xiàn)新型抗菌物質(zhì)的可能性不斷下降,迫切需要尋找新的來(lái)源。海洋提供了非常特殊的生態(tài)環(huán)境,使海洋微生物能夠進(jìn)化出特殊的代謝途徑,產(chǎn)生更多新型的抗菌活性物質(zhì),將在植物病原菌治理及活性物質(zhì)開發(fā)方面發(fā)揮重要作用,因此,從海洋微生物中分離抗真菌蛋白具有重要的研究意義。為了從海洋中尋找具有高效抗菌活性的天然產(chǎn)物,本研究首先采用平板稀釋法和平板擴(kuò)散法從深海中篩選活性菌株。通過(guò)使用不同配方的培養(yǎng)基,對(duì)采集自各種海洋環(huán)境（大洋、北極和南極）的深海樣品進(jìn)行微生物菌株的分離篩選,篩選到了300余株真菌以及大量的細(xì)菌,其中包括了許多具有抗菌活性的微生物。接著以7株植物病原真菌和7株致病細(xì)菌為指示菌進(jìn)一步篩選并鑒定出具有高效抗菌活性的菌株,植物病原真菌包括宛氏擬青霉、膠孢炭疽菌、... 

【文章來(lái)源】：廈門大學(xué)福建省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：123 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
Content
摘要
Abstract
第一章 前言
    1.1 真菌的危害
    1.2 微生物農(nóng)藥
    1.3 海洋活性微生物資源
        1.3.1 海洋微生物的多樣性
        1.3.2 海洋微生物是新型活性物質(zhì)的重要來(lái)源
    1.4 微生物來(lái)源的抗菌蛋白
        1.4.1 微生物來(lái)源抗菌蛋白的分類
        1.4.2 真菌來(lái)源抗菌蛋白的作用機(jī)制
    1.5 抗菌蛋白在農(nóng)業(yè)防治中的應(yīng)用
        1.5.1 利用抗菌蛋白控制植物疾病
        1.5.2 抗菌蛋白的合成
        1.5.3 利用轉(zhuǎn)基因植物表達(dá)抗菌蛋白
    1.6 本課題的研究意義和目的
第二章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 樣品來(lái)源
        2.1.2 受試菌
        2.1.3 培養(yǎng)基
        2.1.4 寡核苷酸引物
        2.1.5 主要試劑及材料
        2.1.6 主要溶液
        2.1.7 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 菌株的初篩及保藏
        2.2.2 拮抗活性菌株的復(fù)篩
        2.2.3 拮抗活性菌株的分子生物學(xué)鑒定
        2.2.4 粗蛋白的分離
        2.2.5 色譜分析法分離抗真菌蛋白
        2.2.6 硝酸銀染色
        2.2.7 質(zhì)譜分析
        2.2.8 N端測(cè)序
        2.2.9 抗真菌蛋白MIC(最低抑制濃度)測(cè)定
        2.2.10 抗真菌蛋白的理化性質(zhì)分析
        2.2.11 添加營(yíng)養(yǎng)源對(duì)發(fā)酵上清活性的影響
        2.2.12 抗菌物質(zhì)應(yīng)用于農(nóng)作物病害防治
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 抗菌活性菌株的分離篩選及初步鑒定
        3.1.1 活性菌株篩選
        3.1.2 活性菌株的鑒定與統(tǒng)計(jì)
    3.2 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的分離純化
        3.2.1 海洋真菌W1的鑒定
        3.2.2 海洋桔青霉W1發(fā)酵上清的抑菌活性
        3.2.3 飽和硫酸銨沉淀及抗菌物質(zhì)的初步鑒定
        3.2.4 DEAE離子交換層析及活性檢測(cè)
        3.2.5 CM離子交換層析及活性檢測(cè)
        3.2.6 SDS-PAGE和硝酸銀染色
        3.2.7 抗真菌蛋白的質(zhì)譜分析
        3.2.8 抗真菌蛋白的N端測(cè)序分析
    3.3 海洋桔青霉W1抗真菌蛋白的理化性質(zhì)分析
        3.3.1 抗真菌蛋白的MIC(最低抑制濃度)測(cè)定
        3.3.2 紫外輻射對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.3 溫度對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.4 加熱時(shí)間對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.5 金屬離子對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.6 有機(jī)溶劑對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.7 pH對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.8 表面活性劑對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
        3.3.9 蛋白酶對(duì)抗真菌蛋白活性的影響
    3.4 添加營(yíng)養(yǎng)源對(duì)發(fā)酵上清活性的影響
    3.5 海洋桔青霉W1在作物病害防治上的應(yīng)用
第四章 小結(jié)與討論
    4.1 小結(jié)
    4.2 討論
展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 第21次大洋科考采集的印度洋樣品站位信息表
附錄2 第22次大洋科考采集的南大西洋樣品站位信息表
附錄3 第26次大洋科考采集的南大西洋樣品站位信息表
附錄4 第5次北極科考采集的沉積物樣品站位信息表
附錄5 第28次南極科考采集的水樣站位信息表
附錄6 第29次南極科考采集的樣品站位信息表
碩士期間發(fā)表的研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]微生物農(nóng)藥研究進(jìn)展[J]. 袁兵兵,張海青,陳靜.  山東輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2010(01)
[2]微生物資源在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中的應(yīng)用[J]. 袁龍剛,張軍林.  陜西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2006(05)
[3]海洋細(xì)菌B-9987菌株產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)及對(duì)幾種植物病原真菌的作用[J]. 田黎,顧振芳,陳杰,黃樂(lè)平,田玲.  植物病理學(xué)報(bào). 2003(01)



本文編號(hào)：3540610