本學位論文以桔小實蠅Bactrocera dorsalis （Hendel）為研究對象,綜合運用殺蟲劑生物測定、抗性選育、生化分析及分子生物學等相關(guān)實驗技術(shù),在室內(nèi)對桔小實蠅進行馬拉硫磷抗性選育的基礎(chǔ)上,進行了代謝抗性相關(guān)生理生化機制的研究,旨在延長有機磷類殺蟲劑的使用時間,同時為田間監(jiān)測和治理桔小實蠅抗藥性提供策略。此外,結(jié)合qPCR技術(shù)明確了桔小實蠅3種代謝酶共11個基因在不同發(fā)育階段和不同組織的表達模式,初步解析了桔小實蠅對馬拉硫磷產(chǎn)生代謝抗性的分子機制。主要的研究結(jié)果如下：1桔小實蠅室內(nèi)馬拉硫磷抗性品系選育對桔小實蠅室內(nèi)種群進行了馬拉硫磷抗性選育。其中,未逐代連續(xù)用藥狀態(tài)下篩選25代,其抗性倍數(shù)僅增長了8.89倍；此后進行逐代連續(xù)用藥篩選,13代后,抗性增長至21.10倍,達中抗水平；交互抗性測定結(jié)果顯示,桔小實蠅馬拉硫磷抗性品系對辛硫磷、毒死蜱、高效氯氰菊酯、阿維菌素和氟蟲腈等藥劑產(chǎn)生了不同程度的交互抗性,其中對辛硫磷、毒死蜱和高效氯氰菊酯的抗性倍數(shù)分別達15.80、14.14和4.14倍。2桔小實蠅對馬拉硫磷代謝抗性的生化機制研究2.1桔小實蠅不同發(fā)育階段3種代謝酶活性比較... 

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文獻綜述
    1 桔小實蠅的發(fā)生及危害
    2 桔小實蠅抗藥性研究概況
        2.1 桔小實蠅抗藥性的發(fā)展
        2.2 桔小實蠅抗性機制的研究
    3 有機磷類殺蟲劑的特點及作用機理
        3.1 有機磷殺蟲劑作用特點
        3.2 有機磷殺蟲劑作用機理
    4 昆蟲對有機磷類殺蟲劑的代謝抗性機制
        4.1 羧酸酯酶介導的有機磷類殺蟲劑的抗性機制
        4.2 GSTs介導的有機磷類殺蟲劑的抗性機制
        4.3 細胞色素P450介導的有機磷類殺蟲劑的抗性機制
    5 馬拉硫磷作用機理及抗性研究
引言
第二章 桔小實蠅抗馬拉硫磷品系的選育
    1 材料與方法
        1.1 供試蟲源
        1.2 主要試劑
        1.3 主要儀器
        1.4 室內(nèi)毒力測定
        1.5 抗性篩選
    2 結(jié)果與分析
        2.1 桔小實蠅對馬拉硫磷的抗性篩選
        2.2 交互抗性的測定
    3 討論
第三章 桔小實蠅對馬拉硫磷代謝抗性的生化機制研究
    第一節(jié) 桔小實蠅不同發(fā)育階段3種代謝酶活性測定
        1 材料與方法
            1.1 供試蟲源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 樣品制備
            1.5 蛋白含量測定
            1.6 CarEs活性測定
            1.7 GSTs活性測定
            1.8 P450s活性測定
        2 結(jié)果與分析
            2.1 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系不同發(fā)育階段CarEs的活性
            2.2 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系不同發(fā)育階段GSTs的活性
            2.3 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系不同發(fā)育階段P450s的活性
        3 討論
    第二節(jié) 桔小實蠅成蟲不同組織3種代謝酶活性測定
        1 材料與方法
            1.1 供試蟲源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 桔小實蠅成蟲組織的解剖
            1.5 實驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系成蟲不同組織CarEs的活性
            2.2 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系成蟲不同組織GSTs的活性
            2.3 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系成蟲不同組織P450s的活性
        3 討論
    第三節(jié) 桔小實蠅幼蟲不同組織3種代謝酶活性測定
        1 材料與方法
            1.1 供試蟲源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 桔小實蠅幼蟲組織的解剖
            1.5 實驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系幼蟲不同組織CarEs的活性
            2.2 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系幼蟲不同組織GSTs的活性
            2.3 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系幼蟲不同組織P450s的活性
        3 討論
第四章 桔小實蠅解毒代謝酶基因的表達模式解析
    第一節(jié) 桔小實蠅不同發(fā)育階段3種解毒代謝酶基因表達模式解析
        1 材料與方法
            1.1 供試蟲源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 引物設(shè)計
            1.5 桔小實蠅不同發(fā)育階段RNA提取及第一鏈cDNA合成
            1.6 定量PCR的引物擴增效率和熔解曲線分析
            1.7 定量PCR
            1.8 數(shù)據(jù)分析方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 定量引物擴增效率及其擴增產(chǎn)物的熔解曲線
            2.2 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系2個CarEs基因在不同發(fā)育階段的表達模式
            2.3 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系4個GSTs基因在不同發(fā)育階段的表達模式
            2.4 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系5個P450s基因在不同發(fā)育階段的表達模式
        3 討論
    第二節(jié) 桔小實蠅不同組織3種解毒代謝酶基因表達模式解析
        1 材料與方法
            1.1 供試蟲源
            1.2 主要試劑
            1.3 主要儀器
            1.4 桔小實蠅成蟲組織(馬氏管、中腸和脂肪體)的解剖
            1.5 桔小實蠅不同組織RNA提取
            1.6 實驗方法
        2 結(jié)果與分析
            2.1 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系2個CarEs基因在不同組織的表達模式
            2.2 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系4個GSTs基因在不同組織的表達模式
            2.3 桔小實蠅馬拉硫磷抗性和敏感品系5個P450s基因在不同組織的表達模式
        3 討論
第五章 主要結(jié)果、結(jié)論與研究展望
    1 主要結(jié)果與結(jié)論
        1.1 桔小實蠅抗性品系選育及交互抗性
        1.2 桔小實蠅馬拉硫磷代謝抗性的生化機制研究
        1.3 桔小實蠅解毒代謝酶基因表達模式解析
    2 研究展望
        2.1 繼續(xù)選育馬拉硫磷抗性品系,提高抗性倍數(shù)
        2.2 開展桔小實蠅馬拉硫磷抗性品系生態(tài)適合度的研究
        2.3 補充代謝抗性機制研究數(shù)據(jù)
        2.4 靶標抗性機制的研究
參考文獻
在讀期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]5種引誘劑對桔小實蠅的引誘效果[J]. 梁關(guān)生,程東美.  廣東農(nóng)業(yè)科學. 2011(13)
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[9]家蠶谷胱甘肽硫-轉(zhuǎn)移酶的組織分布及發(fā)育期變化規(guī)律[J]. 侯成香,桂仲爭.  蠶業(yè)科學. 2007(03)
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博士論文
[1]桔小實蠅消化和解毒代謝相關(guān)基因鑒定及其對藥劑脅迫的應激反應[D]. 申光茂.西南大學 2013
[2]桔小實蠅GSTs生化及分子毒理學特性研究[D]. 胡飛.西南大學 2012
[3]3種書虱酯酶基因的克隆及其mRNA表達水平研究[D]. 唐培安.西南大學 2009

碩士論文
[1]桔小實蠅對常用殺蟲劑的敏感性及其3種解毒酶酶學特性研究[D]. 王京京.西南大學 2013



本文編號：3432375