根癌農(nóng)桿菌（Agrobacterium tumefaciens）是一種棲生于土壤中的革蘭氏陰性植物病原菌,在自然條件下該菌能夠引起雙子葉植物的冠癭瘤疾病。根癌農(nóng)桿菌在侵染宿主的過程中可將自身Ti質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移并整合到宿主細(xì)胞基因組中,使宿主發(fā)生遺傳轉(zhuǎn)化�；谶@一特性,根癌農(nóng)桿菌被廣泛用于絕大部分雙子葉植物以及部分單子葉植物的植物轉(zhuǎn)基因工程中。目前,對(duì)根癌農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化機(jī)制的研究已經(jīng)較為清楚,但仍有許多未知因素影響著該菌的致瘤能力和轉(zhuǎn)基因效率。其中根癌農(nóng)桿菌的鐵代謝平衡和抗氧化脅迫能力與其致瘤能力息息相關(guān)。鐵蛋白在維持細(xì)菌細(xì)胞鐵代謝平衡和應(yīng)對(duì)氧化脅迫方面發(fā)揮重要作用。細(xì)菌中一般存在三種類型的鐵蛋白:Ftn、Bfr和Dps,然而根癌農(nóng)桿菌C58中有且僅有一種Bfr和一種Dps。與其他細(xì)菌相比,根癌農(nóng)桿菌的Dps在N端缺少11個(gè)氨基酸,體外實(shí)驗(yàn)證明根癌農(nóng)桿菌的Dps無法結(jié)合DNA但仍能發(fā)揮鐵解毒的功能;根癌農(nóng)桿菌的Bfr在N端多了8個(gè)氨基酸,其具體功能還未知�；诟┺r(nóng)桿菌鐵蛋白的獨(dú)特性以及鐵代謝對(duì)根癌農(nóng)桿菌致病性的影響,對(duì)根癌農(nóng)桿菌鐵蛋白的研究具有非常重要的意義以及潛在的應(yīng)用價(jià)值。本... 

【文章來源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３－１重疊延伸ＰＣＲ結(jié)果??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?（ＤＬ?２０００）?；?（Ａ）?１：?ＰＣＲ擴(kuò)增妒基因啟動(dòng)子＋妒廁１上游序列（６８９?ｂｐ）?；?２：??ＰＣＲ擴(kuò)增階〃＾下游序列（３４０?ｂｐ）?；?（Ｂ）?１和２：?ＰＣＲ擴(kuò)增階基因啟動(dòng)子（Ｃ）?１和２：?ＰＣＲ??

第３章實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析??Ａ?Ｂ?Ｃ??Ｍ?１?２?Ｍ?１?２?Ｍ?１?２??■??ｉｚｚ?％ｚ??ＩＨ１ＨＨ??圖３－１重疊延伸ＰＣＲ結(jié)果??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?（ＤＬ?２０００）?；?（Ａ）?１：?ＰＣＲ擴(kuò)增妒基因啟動(dòng)子＋妒廁１上游序列（６８９?ｂｐ）?；?２：??ＰＣＲ擴(kuò)增階〃＾下游序列（３４０?ｂｐ）?；?（Ｂ）?１和２：?ＰＣＲ擴(kuò)增階基因啟動(dòng)子（Ｃ）?１和２：?ＰＣＲ??擴(kuò)增石／嚴(yán)。??Ｆｉｇ．?３－１?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＳＯＥ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ?（ＤＬ?２０００）；?（Ａ）?１：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｕｐｓｔｒｅａｍ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｂｆｒＭ６ｎＬ?＋?ｂｆｒ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ；??２：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｄｏｗｎｓｔｒｅａｍ?ｓｅｑｕｅｎｃｅ?ｏｆ?ｂｆ／ｍｌ?ｇｅｎｅ；?（Ｂ）?１?ａｎｄ?２：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ??ｇｅｎｅ?ｂｆ／１６０１?＋?ｂｆｒ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ；?（Ｃ）?１：?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ??將ＰＣＲ擴(kuò)增所得的妒和妒？基因片段以及ｐＥＴ－３０ａ質(zhì)粒用Ｉ和／／／ｍｉ?ＩＩＩ酶??切后，用Ｔ４連接酶連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌ＤＨ５ａ。挑取卡那霉素抗性平板上的??單克隆進(jìn)行菌落ＰＣＲ鑒定。圖３－２為菌落ＰＣＲ鑒定目的基因是否連入載體質(zhì)粒的結(jié)果圖。??提取圖３－２?Ａ中的陽性克�。蔡�(hào)、７號(hào)和圖３－２?Ｂ中的陽性克�。碧�(hào)的質(zhì)粒（依次是??ｐＥＴ－３０ａ－Ｂｆｒ、ｐＥＴ－３０ａ－Ｂｆｒ＿＾ｐＥＴ－３０ａ－Ｄｐｓ），送至南京擎科生

第３章實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?８?９??ＩＱＯｋＰａ??７０?ｋＤａ?ＨＢＰ??４０?ｋＢａ?ｌｊ｜．＇．：??３０?ｋＤａ?＇ｔｔＫ－?’：??２５ｋＤａ?ｆＰ?翻麵棚細(xì)＾奪??１４?ｋＤａ?｜??圖３－４各重組蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析??Ｍ：?ｐｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒ；?１、４、７：純化后的?Ｂｆｒ－Ｈｉｓ；?２、５、８：純化后的?ＢｆｒＭ６０Ｌ－Ｈｉｓ；?３、６、９：純化??后的?Ｄｐｓ－Ｈｉｓ。??Ｆｉｇ．?３－４?ＳＤＳ－ＰＡＧＥ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ??Ｍ：?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｍａｒｋｅｒ；?１，４，?７：?Ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｂｆｒ－Ｈｉｓ；?２，?５，?８：?Ｐｕｒｉｆｉｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ＢｆｒＭ６０Ｌ－Ｈｉｓ；?３，?６，?９：?Ｐｕｒｉｆｉｅｄ??ｐｒｏｔｅｉｎ?Ｄｐｓ－Ｈｉｓ．??在細(xì)菌體內(nèi)一個(gè)Ｂｆｉ？由相同的２４個(gè)亞基自組裝形成２４聚體（約４８０?ｋＤａ），一個(gè)??Ｄｐｓ由相同的１２個(gè)亞基自組裝形成１２聚體（約２２０?ｋＤａ）。為確定Ｈｉｓ－ｔａｇ是否會(huì)影響??根癌農(nóng)桿菌鐵蛋白在體外的自組裝，我們利用Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＥ鑒定純化過后的各重組蛋??白在體外的自組裝形式，結(jié)果如圖３－５所示。我們發(fā)現(xiàn)，在體外條件下，Ｄｐｓ能夠較為??穩(wěn)定的自組裝形成１２聚體（圖３－５?Ａ）；而Ｂｆｒ—部分能自組裝形成２４聚體，另一部??分形成低聚體（絕大多數(shù)以２聚體形式存在）（圖３－５?Ｂ），這與其他細(xì)菌Ｂｆｒ在體外自??組裝形式基本相同（張瑜等，２０１７）。說明Ｈｉｓ－ｔａｇ的存在不影響根癌農(nóng)桿菌鐵蛋白在體??外的

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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