植物病原體和真菌的細胞壁中一般都含有大量的幾丁質(zhì),鏈霉菌（Streptomyces）是一種幾丁質(zhì)酶高產(chǎn)菌株,除了可以產(chǎn)生大量的幾丁質(zhì)酶外,其產(chǎn)生抗生素的能力在植物病害生物防治的生產(chǎn)實踐中具有巨大的應用潛力。本研究對一株鏈霉菌EBI-001進行產(chǎn)幾丁質(zhì)酶條件進行優(yōu)化,在基因水平對該菌高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶進行生物信息學分析,旨在為幾丁質(zhì)酶基因在分子生物學水平上的改造、表達載體構建以及工程菌的開發(fā)提供更多的科學依據(jù)與理論基礎。對前期篩選得到的一株具有高抑菌活性和高產(chǎn)幾丁質(zhì)酶能力的生防菌株EBI-001進行了菌株EBI-001的形態(tài)學觀察、培養(yǎng)特征學觀察以及等多種生理生化試驗。結果表明,結合16S r DNA結果構建系統(tǒng)發(fā)育樹及ANI分析顯示,菌株EBI-001屬于Streptomyces albidoflavus的一個亞種。為了進一步驗證菌株EBI-001的生物學功能,對菌株EBI-001進行基于Illumina Mi Seq測序平臺的二代測序,結合功能蛋白數(shù)據(jù)庫注釋結果可知,該菌較強的代謝能力使其在工程開發(fā)方面具有較廣的應用前景。EBI-001基因組序列經(jīng)anti SMASH分析共得到24個次級代... 

【文章來源】：哈爾濱工業(yè)大學黑龍江省 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 緒論
    1.1 課題研究的目的和意義
    1.2 幾丁質(zhì)酶的研究進展
        1.2.1 幾丁質(zhì)酶的分類
        1.2.2 幾丁質(zhì)酶的性質(zhì)
        1.2.3 幾丁質(zhì)酶基因的克隆
        1.2.4 幾丁質(zhì)酶基因的功能結構
        1.2.5 幾丁質(zhì)酶的應用
    1.3 微生物產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的研究
        1.3.1 產(chǎn)幾丁質(zhì)酶微生物的種類及分布
        1.3.2 鏈霉菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的研究
        1.3.3 微生物產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的發(fā)酵工藝研究進展
    1.4 鏈霉菌的其他生物學價值
        1.4.1 抑菌活性物質(zhì)
        1.4.2 抗腫瘤細胞毒活性物質(zhì)
        1.4.3 酶活性物質(zhì)
    1.5 本文的主要研究內(nèi)容及技術路線
        1.5.1 主要研究內(nèi)容
        1.5.2 技術路線圖
第2章 材料與方法
    2.1 材料與儀器
        2.1.1 菌種的來源
        2.1.2 實驗材料與試劑
        2.1.3 實驗儀器與設備
        2.1.4 實驗試劑的配制
    2.2 實驗方法
        2.2.1 菌種EBI-001的活化與傳代
        2.2.2 菌株EBI-001功能活性檢測
        2.2.3 菌株EBI-001形態(tài)學觀察及培養(yǎng)特征
        2.2.4 菌株EBI-001生理生化試驗
        2.2.5 菌株EBI-001基因組測序
        2.2.6 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶培養(yǎng)基配方優(yōu)化
        2.2.7 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶發(fā)酵工藝優(yōu)化
        2.2.8 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶酶活性質(zhì)初探
        2.2.9 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶家族基因生物信息學分析
        2.2.10 數(shù)據(jù)分析
第3章 菌株EBI-001菌種鑒定及基因組測序分析
    3.1 菌株EBI-001菌株鑒定
        3.1.1 菌株EBI-001的形態(tài)學特征觀察
        3.1.2 菌株EBI-001的培養(yǎng)特征觀察
        3.1.3 菌株EBI-001的生理生化特征測定結果
        3.1.4 菌株EBI-001 16S r DNA序列分析結果
    3.2 菌株EBI-001基因組二代測序分析
        3.2.1 菌株EBI-001基因組框架分析
        3.2.2 菌株EBI-001蛋白編碼基因功能注釋
        3.2.3 菌株EBI-001次級代謝產(chǎn)物合成基因簇分析
    3.3 菌株EBI-001抑菌活性研究
    3.4 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶活性研究
    3.5 本章小結
第4章 菌株EBI-001產(chǎn)幾丁質(zhì)酶發(fā)酵優(yōu)化
    4.1 菌株產(chǎn)酶培養(yǎng)基優(yōu)化
        4.1.1 單因素實驗
        4.1.2 Plackett-Burman實驗結果
        4.1.3 最陡爬坡試驗選擇最大響應區(qū)域
        4.1.4 響應面分析及最佳發(fā)酵培養(yǎng)基確定
    4.2 菌株EBI-001產(chǎn)酶條件優(yōu)化實驗
        4.2.1 單因素實驗
        4.2.2 響應面分析及最佳培養(yǎng)條件確定
    4.3 幾丁質(zhì)酶的酶學性質(zhì)研究
        4.3.1 幾丁質(zhì)酶最適pH的研究
        4.3.2 幾丁質(zhì)酶最適溫度的研究
        4.3.3 金屬離子對幾丁質(zhì)酶活性的影響
        4.3.4 不同蛋白酶抑制劑對幾丁質(zhì)酶活性的影響
    4.4 本章小結
第5章 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶家族生物信息學分析及幾丁質(zhì)代謝通路分析
    5.1 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶家族預測
        5.1.1 菌株EBI-001幾丁質(zhì)酶基因家族的鑒定與分類
        5.1.2 幾丁質(zhì)酶家族理化性質(zhì)分析
        5.1.3 幾丁質(zhì)酶家族跨膜區(qū)域分析
        5.1.4 幾丁質(zhì)酶家族信號肽預測與分析
        5.1.5 幾丁質(zhì)酶家族保守結構域分析
        5.1.6 幾丁質(zhì)酶基因家族二級結構預測分析
        5.1.7 幾丁質(zhì)酶基因家族磷酸化位點分析
        5.1.8 幾丁質(zhì)酶基因家族三級結構預測
    5.2 菌株EBI-001體內(nèi)幾丁質(zhì)代謝流程通路預測
        5.2.1 菌株EBI-001編碼參與幾丁質(zhì)代謝的酶基因預測
        5.2.2 菌株EBI-001體內(nèi)幾丁質(zhì)代謝流程通路預測
    5.3 本章小結
結論
參考文獻
附錄
攻讀碩士學位期間發(fā)表論文及其他成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3186045