綠僵菌（Metarhizium roberstii）是一類重要的蟲生真菌,已經成功用于多種農林害蟲的生物防治,但產孢率低是限制其應用推廣的一個重要因素。轉錄因子是信號傳導途徑上重要的元件,通過調控靶標基因的表達從而進一步調控細胞的生長發(fā)育,對該類因子調控產孢功能的研究,有助于從分子水平上了解菌株中產孢相關基因表達調控的分子機制。為探明此類轉錄因子在綠僵菌中可能的調控功能,本研究選擇了其中TEA/ATTS家族的AbaA以及APSES家族的StuA基因作為研究對象對綠僵菌中轉錄因子的產孢相關調控功能進行了深入的研究。通過對其序列及結構特征進行初步分析,再通過基因敲除等手段獲得基因敲除突變株,對突變株在宏觀、微觀水平上的形態(tài)特征以及分子水平上的特征與野生型菌株進行差異比較,以進一步了解其相關功能。此外,本研究在實驗室前期工作的基礎上,推測綠僵菌中milRNA7（micro like RNA7）的功能可能與綠僵菌的產孢調控過程相關。本研究通過構建一種可以特異性研究micro RNA功能的STTM體系,對其靶標micro RNA的功能進行抑制,通過分析該轉基因菌株與野生型菌株的差異以推斷該mil... 

【文章來源】：安徽農業(yè)大學安徽省

【文章頁數】：113 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

不同真菌的APSESDNA結合結構域多序列比對Fig.3-2.MultiplealignmentoftheAPSESDNA-bindingdomainfromdifferentfungi

段 StuA 下游 3-4 重組載體的構建及轉基因菌株的on of recombinant plasmids and acq臂，片段大小分別為 1008b StuA 基因敲除重組質粒，以基因 CDS 區(qū)序列為驗證，野生型羅伯茨綠僵菌應的 1050bp 大小的目的的遺傳穩(wěn)定性，將敲除株因條帶，做最后檢測(圖 31285bp對照株

可以推斷所選 ARSEF23APSES 轉錄因子基因（EF-II 進化支 APSES 家族轉錄因子中的 StuA�；诒Ｊ氐慕Y構以及系統(tǒng)遺傳樹的相似性，該基因被鑒定為 StuA 轉錄因子敲除等方法對其調控功能進行進一步的研究。載體的構建及轉基因菌株的獲得基因序列同源檢索分析，在羅伯茨綠僵菌基因組和轉錄組數DS 序列。根據這個 CDS 序列設計引物（表 3-3），通過 StuA 基因的上下游臂連入載體 pDHt-bar 質粒的 bar 基因的長度符合目的基因擴增片段大小的產物（圖 3-4），利用 N測序結果，確定上下游臂是否成功連入載體中。

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本文編號：2903886