三唑類和嘧啶醇類殺菌劑作為兩種廣泛使用的手性殺菌劑,目前已在多種環(huán)境介質(zhì)中檢測到殘留超標(biāo),生態(tài)安全事故頻發(fā)。然而關(guān)于人CYP3A4酶介導(dǎo)的三唑類和嘧啶醇類殺菌劑立體選擇性代謝研究匱乏,分子作用機制亦不明確。本文選取葉菌唑、氯/氟苯嘧啶醇為目標(biāo)化合物,分離制備了對映體,進(jìn)行了關(guān)于CYP3A4酶介導(dǎo)代謝的立體選擇性研究,從與CYP3A4酶相互作用角度,詮釋了這兩類殺菌劑的代謝立體選擇差異性的分子機制。主要獲取的結(jié)果和結(jié)論如下：(1)采用高效液相色譜(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)成功分離和制備了葉菌唑四個單一手性異構(gòu)體,并利用圓二色光譜儀(Circular Dichroism, CD)和含時密度泛函理論(Time-dependent Density Functional Theory,TDDFT)鑒定了各對映體的絕對化學(xué)構(gòu)型。(2)選取葉菌唑cis-RS和cis-SR兩種單體,研究了人肝微粒體(Human Liver Microsome, HLM)和CYP3A4酶介導(dǎo)的代謝的立體選擇性差異,發(fā)現(xiàn)葉菌唑能被HLM和CYP3A4酶降解,其中,CYP3A4酶為葉菌唑的主要代謝酶,其對葉菌唑的降解率遵循cis-RScis-SR.代謝過程中,對映體分?jǐn)?shù)(Enantiomer Fraction, EF)由0.5逐漸增大到0.82,表明cis-RS能優(yōu)先被CYP3A4酶代謝,存在顯著的對映體選擇性差異。(3)針對氯/氟苯嘧啶醇進(jìn)行了人CYP3A4酶介導(dǎo)的體外代謝研究,發(fā)現(xiàn)氯苯嘧啶醇和氟苯嘧啶醇均能被CYP3A4酶代謝。氟苯嘧啶醇代謝速率大于氯苯嘧啶醇。氯苯嘧啶醇降解率與時間不成規(guī)律性變化,代謝無明顯對映體差異；氟苯嘧啶醇代謝具有一定立體選擇性差異,R型-氟苯嘧啶醇能優(yōu)先被CYP3A4酶降解,并且代謝具有顯著時間依賴性。(4)采用CYP3A4 Glo熒光素酶檢測技術(shù)分析了葉菌唑單體對人CYP3A4酶的活性影響。通過熒光光譜技術(shù)在分子水平上研究了葉菌唑?qū)τ丑w單體與人CYP3A4酶結(jié)合后誘導(dǎo)的CYP3A4酶的構(gòu)象變化,比較了不同單體結(jié)合力強弱。從相互作用角度分析了CYP3A4酶介導(dǎo)的葉菌唑的立體選擇性代謝差異。葉菌唑是CYP3A4酶的強抑制劑,抑制效果具有濃度依賴性并遵循cis-SRcis-RS。葉菌唑?qū)τ丑wcis-RS和cis-SR與CYP3A4酶結(jié)合模式各異,對CYP3A4蛋白結(jié)構(gòu)微環(huán)境產(chǎn)生的影響不同,可能引起蛋白功能破壞程度的差異。(5)從分子間相互作用角度分析了氯/氟苯嘧啶醇與CYP3A4酶的作用機制。酶活性檢測發(fā)現(xiàn)氯/氟苯嘧啶醇是CYP3A4酶的抑制劑,抑制效果遵循S-氟苯嘧啶醇R-氯苯嘧啶醇S-氯苯嘧啶醇R-氟苯嘧啶醇。熒光光譜法結(jié)合分子對接證實了氯/氟苯嘧啶醇會導(dǎo)致CYP3A4酶微觀結(jié)構(gòu)的改變。氯/氟苯嘧啶醇對映體與CYP3A4酶的相互作用力主要為氫鍵和范德華力,但作用強度有所差異,順序分別為R-氯苯嘧啶醇S-氯苯嘧啶醇和S-氟苯嘧啶醇R-氟苯嘧啶醇。(6)通過酵母雙雜實驗(Yeast Two-hybrid Assay)發(fā)現(xiàn)葉菌唑和氯/氟苯嘧啶醇對雄激素受體(Androgen Receptor, AR)均具有拮抗作用。葉菌唑的兩個對映體ds-RS和cis-SR經(jīng)人CYP3A4酶代謝后,代謝產(chǎn)物對人AR受體拮抗效應(yīng)差別顯著,cis-SR呈現(xiàn)代謝活化,而cis-RS表現(xiàn)為代謝減毒。
【學(xué)位單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2016
【中圖分類】：X592
【部分圖文】：

生物活化和毒性降解等起著至關(guān)重要的作用。至今，人體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)的Ｐ４５０酶約有逡逑５０邋種，主要包括邋ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ａ６、ＣＹＰ２Ｃ、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ３Ａ４邋等。逡逑其中ＣＹＰ３Ａ４酶占人肝臟和小腸中的Ｐ４５０酶的３０％左右（圖１．３），是機體最重要逡逑Ｐ４５０酶。ＣＹＰ３Ａ４酶不僅能對內(nèi)源性底物，如類固醇．脂肪酸等進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化，逡逑也是許多外源性化學(xué)物質(zhì)和藥物的結(jié)合受體，重要的藥物代謝酶，臨床上約有５０％逡逑的藥物靠它代謝。逡逑ＣＹＰ邋３Ａ４逡逑３４，４％逡逑巧逡逑圖１．３人體肝內(nèi)Ｐ４５０酶的組成逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．３邋Ｔｈｅ邋ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ邋ｏｆ邋Ｐ４５０邋ｅｎｚｙｍｅ邋ｉｎ邋ｈｕｍａｎ邋ｌｉｖｅｒ逡逑１．３．２邋ＣＹＰ３Ａ４酶與污染物的相互作用逡逑目前關(guān)于Ｐ４５０酶與污染物的相互作用研究曰益增多。陳景文等通過密度泛函逡逑理論研究了關(guān)于ＣＹＰ４５０酶對ＢＤＥ－４７代謝的毒性機理和怲徑，建立計算方法ＬNB預(yù)逡逑測參與污染物代謝轉(zhuǎn)化的主要ＣＹＰ酶１Ｗ。呂酷等選取鼠ＣＹＰ２Ｂ１對；種手性ＰＣＢ逡逑進(jìn)行了對映體水平上的代謝研究，發(fā)現(xiàn)Ｓ－ＰＣＢ邋４５和＜Ｓ－ＰＣＢ邋％可Ｗ被優(yōu)先降解，逡逑代謝呈現(xiàn)立體差異，而ＰＣＢ邋１３２代謝則不存在對映體差異ＩＷ］。許多Ｓ唾類抗真菌逡逑藥如l#康唾、伊曲康唾等是ＣＹＰ３Ａ４的強抑制劑，通過與酶分子直接結(jié)合Ｌ義抑制逡逑ＣＹＰ３Ａ４的酶活性

Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｔｈｅ邋ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋Ｐ４５０邋Ｇｌｏ？邋Ａｓｓａｙ逡逑光譜逡逑學(xué)是利用生物大分子本身自帶的巧光發(fā)色團（巧源巧光探的巧光發(fā)色團（外源巧光探針），結(jié)合各種相關(guān)的巧光分析、功能及交互作用等信息，廣泛應(yīng)用于小分子化合物與蛋白用研究。如Ｗｉｌｌｉａｍ等人曾經(jīng)采用巧光分析技術(shù)對疏水性酶的結(jié)合位點、結(jié)合常數(shù)等進(jìn)行探究ｉｎｉ。污染物通過氯鍵、華力等非共價結(jié)合力與蛋白結(jié)合后可能引起巧光光譜的變和偏振度的改變、特征吸收峰的位移、新巧光峰的出現(xiàn)等，巧光生色基團所處微環(huán)境的變化情況，并獲得小分子化合物的相關(guān)參數(shù)和信息。逡逑

檢測劑逡逑？逡逑圖１．４Ｐ４５０Ｇ１Ｏ？檢測原理圖逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．４邋Ｔｈｅ邋ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋Ｐ４５０邋Ｇｌｏ？邋Ａｓｓａｙ逡逑１．４．３巧光光譜逡逑巧光光譜學(xué)是利用生物大分子本身自帶的巧光發(fā)色團（巧源巧光探針）或通逡逑過外來標(biāo)記的巧光發(fā)色團（外源巧光探針），結(jié)合各種相關(guān)的巧光分析技術(shù)來收逡逑集分子結(jié)構(gòu)、功能及交互作用等信息，廣泛應(yīng)用于小分子化合物與蛋白質(zhì)等生物逡逑大分子相互作用研究。如Ｗｉｌｌｉａｍ等人曾經(jīng)采用巧光分析技術(shù)對疏水性探針ＴＮＳ逡逑和ＣＹＰ３Ａ４酶的結(jié)合位點、結(jié)合常數(shù)等進(jìn)行探究ｉｎｉ。污染物通過氯鍵、疏水、靜逡逑電作用或范德華力等非共價結(jié)合力與蛋白結(jié)合后可能引起巧光光譜的變化，如巧逡逑光福射強度和偏振度的改變、特征吸收峰的位移、新巧光峰的出現(xiàn)等，從而了解逡逑蛋白分子中巧光生色基團所處微環(huán)境的變化情況，并獲得小分子化合物與生物大逡逑分子結(jié)合機制的相關(guān)參數(shù)和信息。逡逑１．５課題研究目的、巧容與意義逡逑１．５．１課題研究目的逡逑通過體外代謝實驗并結(jié)合巧光光譜、分子模擬等方法分析ＣＹＰ３Ａ４酶介導(dǎo)的逡逑葉菌噸和氯／l#《喃巧醇代謝的對映體選擇性差異，同時考察配體與人ＣＹＰ３Ａ４酶邐—逡逑的結(jié)合模式，了解配體的結(jié)合對人ＣＹＰ３Ａ４酶構(gòu)象的具體影響，進(jìn)一步從ＣＹＰ３Ａ４逡逑１１逡

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉松燦;裘福榮;繆萍;朱蕾蕾;曾金;李秋月;賀敏;蔣健;;健康志愿者多劑量服用左金丸對CYP3A4活性的影響[J];中成藥;2015年07期

2 李艷梅;王剛;黃志;吳懼;;CYP3A4基因多態(tài)性與漢族小兒耐藥性癲癇的關(guān)系[J];中國新藥與臨床雜志;2011年10期

3 羅琳;胡煒華;馮慧玲;饒云;張紅;夏春華;熊玉卿;;CYP3A4基因多態(tài)性對進(jìn)食后阿托伐他汀鈣藥代動力學(xué)的影響[J];南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2016年02期

4 王雨露;徐素梅;呂淑河;徐平聲;;高脂飲食及CYP3A4基因多態(tài)性對西地那非在健康中國受試者體內(nèi)藥動學(xué)的影響[J];中國新藥與臨床雜志;2016年07期

5 劉潔;韓曉文;李芹;焦建杰;高思楠;孟素蕊;婁建石;;燈盞花素對大鼠CYP3A4體內(nèi)活性的影響[J];時珍國醫(yī)國藥;2011年09期

6 裴波;張凱戀;查勇;李勇;代佑果;何金華;甘平;寸英麗;;CYP3A4基因多態(tài)性與晚期胃癌患者紫杉醇化療敏感性相關(guān)性研究[J];中國藥房;2016年14期

7 徐文;孫術(shù)紅;劉濤;馬敏;隋忠國;;金銀花提取物及主要成分對藥物代謝酶CYP3A4的活性抑制作用研究[J];中國執(zhí)業(yè)藥師;2012年02期

8 姜松;熊友健;楊玉明;趙緒元;;基于CYP3A4代謝的相關(guān)藥物對口服避孕藥的影響[J];中南藥學(xué);2010年11期

9 張韜;彭華毅;劉洪旭;黃慧琴;;銀杏葉提取物及其不同成分對CYP3A4活性的影響[J];中國新藥雜志;2011年09期

10 聶婧栩;宋艷;段金菊;趙生芳;;服用卡馬西平癲癇患者CYP3A4基因多態(tài)性的研究[J];中國藥房;2010年24期

相關(guān)會議論文 前10條

1 董勝男;褚海辰;;CYP3A4基因檢測對脊柱手術(shù)病人術(shù)后舒芬太尼合理用量的指導(dǎo)意義[A];中國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會[CSIA]年會暨第二屆全國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會麻醉專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2015年

2 毛侃瑯;徐新云;毛吉炎;;CYP3A4高表達(dá)細(xì)胞株建立及其對三氯乙烯毒性的影響[A];第六屆中國毒理學(xué)會免疫毒理專業(yè)委員會換屆及學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2016年

3 曾曉暉;石磊;趙樹進(jìn);曾維再;;CYP3A4基因多態(tài)性與臨床疾病的關(guān)系[A];廣東省藥學(xué)會2007學(xué)術(shù)年會論文集[C];2008年

4 徐新云;毛侃瑯;毛吉炎;;CYP3A4基因沉默和高表達(dá)對三氯乙烯致肝細(xì)胞毒性的影響[A];中國毒理學(xué)會第六屆全國毒理學(xué)大會論文摘要[C];2013年

5 劉英志;紀(jì)雅麗;劉勇波;劉少艷;;CYP3A4基因多態(tài)性對舒芬太尼抑制中國漢族人群乳房腫塊切除術(shù)患者切皮時體動反應(yīng)半數(shù)有效效應(yīng)室靶濃度的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會[CSIA]年會暨第二屆全國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會麻醉專業(yè)委員會成立大會論文匯編[C];2015年

6 張倩;;辛伐他汀和阿托伐他汀與CYP3A4酶抑制劑在心內(nèi)科患者中聯(lián)用情況調(diào)查[A];中國中藥雜志2015/專集：基層醫(yī)療機構(gòu)從業(yè)人員科技論文寫作培訓(xùn)會議論文集[C];2016年

7 范嵐;王連生;陳堯;譚志榮;周宏灝;;茵梔黃誘導(dǎo)CYP3A4對奧美拉唑的磺化和CYP2C19對奧美拉唑的羥化[A];第八次全國藥物與化學(xué)異物代謝學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2006年

8 袁釗;熊玉卿;;OATP1B1及CYP3A4基因多態(tài)性對阿托伐他汀轉(zhuǎn)運代謝影響的分子機制研究[A];第十三次全國臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2012年

9 李爽;繆曉輝;胡卓漢;;慢性乙型肝炎病毒感染對細(xì)胞色素P450同工酶CYP3A4表達(dá)的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二次全國病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2005年

10 史卉妍;屈霞;陽國平;嚴(yán)謹(jǐn);羅麗芳;歐陽冬生;;CYP2C19基因型與CYP3A4抑制藥紅霉素對伏立康唑藥動學(xué)的影響[A];中國藥理學(xué)會第九次全國會員代表大會暨全國藥理學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 常馨予;民族因素及CYP3A4基因多態(tài)性對替硝唑藥動學(xué)影響的研究[D];沈陽藥科大學(xué);2010年

2 朱逢佳;ANXA1在腫瘤細(xì)胞多藥耐藥和藥物代謝酶CYP3A4表達(dá)調(diào)控中的作用[D];浙江大學(xué);2010年

3 左金梁;中國多民族藥代酶基因多態(tài)性暨CYP3A4~*18對唑吡坦藥動學(xué)影響[D];沈陽藥科大學(xué);2011年

4 王向文;CYP3A4基因單核苷酸多態(tài)性同兒童ALL大劑量甲氨蝶呤治療不良反應(yīng)的相關(guān)性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

5 王黎青;中國人群CYP1A2、CYP2E1、CYP3A4基因多態(tài)性與茶堿體內(nèi)清除率的相關(guān)性研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

6 涂美娟;OCT1及CYP3A4介導(dǎo)的吡咯里西啶生物堿肝臟轉(zhuǎn)運及毒性研究[D];浙江大學(xué);2014年

7 李越;人源CYP450s高表達(dá)體系和核受體介導(dǎo)的人源CYP3A4及MDR1誘導(dǎo)作用研究體系的構(gòu)建和應(yīng)用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

8 閆良;孕烷X受體介導(dǎo)的藥物代謝酶CYP3A4誘導(dǎo)表達(dá)的表觀遺傳學(xué)機制[D];鄭州大學(xué);2017年

9 尹明;基于基因打靶技術(shù)的人胚胎干細(xì)胞向功能性肝細(xì)胞分化的研究[D];吉林大學(xué);2014年

10 原永芳;丹參對氯沙坦藥代動力學(xué)影響及其在中藥與西藥相互作用中的意義[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 汪海飛;CYP3A4介導(dǎo)的葉菌唑與氟苯嘧啶醇立體選擇性代謝研究[D];浙江大學(xué);2016年

2 程艷芳;EGFR-TKI代謝酶CYP3A4基因多態(tài)性與初治晚期NSCLC患者療效及不良反應(yīng)的關(guān)系[D];石河子大學(xué);2017年

3 石亮;紅酒中沒食子酸對CYP3A4介導(dǎo)的硝苯地平代謝的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

4 毛曉琴;北五味子對P-糖蛋白轉(zhuǎn)運活性及對細(xì)胞色素氧化酶CYP3A4代謝活性的影響[D];中南大學(xué);2007年

5 張海青;CYP3A4基因多態(tài)性對舒芬太尼用于剖宮產(chǎn)術(shù)后鎮(zhèn)痛藥物用量的影響[D];青島大學(xué);2015年

6 何雅君;基于CYP3A4代謝的中藥麝香保心丸多成分相互作用研究[D];上海交通大學(xué);2012年

7 丁春燕;二仙湯療效與CYP3A4基因多態(tài)性的關(guān)系[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2009年

8 宋艷;卡馬西平的群體藥代動力學(xué)及其代謝酶CYP3A4基因多態(tài)性研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

9 李艷梅;西南地區(qū)兒童CYP3A4基因多態(tài)性分析與耐藥性癲癇相關(guān)性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

10 劉冬英;幾種植物化學(xué)物對人孕烷X受體介導(dǎo)的CYP3A4轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)作用研究[D];浙江大學(xué);2005年

本文編號：2812331