【摘要】：【目的】氣味結合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆蟲寄主定位、產卵地選擇等行為中發(fā)揮重要作用,克隆與鑒定小菜蛾Plutella xylostella OBP基因、明確其與配體化合物的結合特性有助于闡明小菜蛾嗅覺識別的分子機制�！痉椒ā坷肞CR技術克隆小菜蛾OBP2,對獲得的編碼序列全長進行信號肽及跨膜區(qū)域預測,用DNAMAN與其他昆蟲的OBP2進行多序列比對,采用MEGA5.0鄰接法(neighbor-joining method,NJ)構建進化樹。通過實時定量PCR(qRT-PCR)分析Pxyl OBP2在小菜蛾不同發(fā)育階段和不同組織中的表達模式。構建原核表達載體p ET28aPxyl OBP2,進行原核表達及蛋白純化。利用熒光競爭結合實驗對Pxyl OBP2蛋白與39種配基化合物的結合特性進行分析�！窘Y果】成功獲得小菜蛾OBP2基因Pxyl OBP2(Gen Bank登錄號:KT070562)的編碼序列全長,其完整開放閱讀框大小為546 bp,編碼182個氨基酸,具有氣味結合蛋白典型的6個保守半胱氨酸結合位點。熒光定量PCR結果表明,發(fā)育表達模式顯示,Pxyl OBP2在未交配雄性成蟲中的表達量均明顯高于雌性成蟲和已交配雄蟲;組織表達模式顯示,Pxyl OBP2在足中的表達量高于其他組織。經預測成熟蛋白大小為22.24 k Da,等電點5.69。SDS-PAGE結果顯示融合蛋白成功表達。熒光競爭結合實驗對3種性信息素和36種植物揮發(fā)物結合發(fā)現,Pxyl OBP2與性信息素Z-11-16:Ald可以結合,解離常數48.951μmol/L;可以和11種寄主植物揮發(fā)物有效結合,其中,與芳樟醇、正壬醇結合能力最強,解離常數分別為4.733和6.861μmol/L�！窘Y論】本研究明確了Pxyl OBP2的核苷酸、氨基酸序列,并根據qRT-PCR和熒光競爭結合實驗結果,推斷Pxyl OBP2與小菜蛾雄蟲尋求配偶有關,且寄主揮發(fā)物芳樟醇、正壬醇起協(xié)同促進作用。

【參考文獻】

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1 劉一鵬;劉楊;楊婷;桂富榮;王桂榮;;小菜蛾普通氣味受體基因PxylOR9的鑒定及功能研究[J];昆蟲學報;2015年05期

2 錢凱;馮波;巫詡亮;勞沖;沈幼蓮;杜永均;;松墨天牛OBP基因MaltOBP2和MaltOBP6的克隆、序列分析及組織表達譜和原核表達研究[J];昆蟲學報;2015年05期

3 張治科;吳圣勇;雷仲仁;;西花薊馬化學感受蛋白的cDNA克隆、時空表達分析及組織定位[J];昆蟲學報;2015年01期

4 吉挺;沈芳;梁勤;吳黎明;劉振國;羅岳雄;;中華蜜蜂OBP3基因的克隆、原核表達及組織表達譜[J];昆蟲學報;2014年08期

5 宋月芹;解幸承;董鈞鋒;仵均祥;;梨小食心蟲氣味結合蛋白GmolOBP3的cDNA克隆、表達譜及結合特性分析[J];昆蟲學報;2014年03期

6 陳玲;李紅亮;周宇翔;趙磊;張林雅;倪翠俠;商晗武;;桔小實蠅氣味結合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、組織表達及配基結合特性[J];昆蟲學報;2013年06期

7 沈幼蓮;高揚;杜永均;;植物氣味化合物與斜紋夜蛾性信息素的協(xié)同作用[J];昆蟲學報;2009年12期

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 譚靜;陳玲;李紅亮;王強;商晗武;;桔小實蠅雌雄蟲對18種寄主揮發(fā)物的觸角電位差異比較[J];浙江農業(yè)科學;2016年05期

2 馮波;郭前爽;毛必鵬;杜永均;;松墨天�；瘜W感受組織熒光定量PCR內參基因的鑒定與篩選[J];昆蟲學報;2016年04期

3 程小娟;蔡立君;鄭麗雙;覃江梅;黃宇萍;尤民生;;小菜蛾氣味結合蛋白OBP2基因的克隆、表達譜及其結合特性分析[J];昆蟲學報;2016年04期

4 張治科;吳圣勇;雷仲仁;;西花薊馬氣味結合蛋白的cDNA克隆、序列分析及時空表達[J];中國農業(yè)科學;2016年06期

5 王然;張曉曼;李峰奇;吳帆;李紅亮;羅晨;;煙粉虱MED隱種氣味結合蛋白OBP8的克隆、原核表達及與植物揮發(fā)物的結合特性[J];植物保護學報;2016年01期

6 吳帆;黃君君;譚靜;唐明珠;李紅亮;;中華蜜蜂信息素結合蛋白OBP10的基因克隆、原核表達和配基結合特性分析[J];昆蟲學報;2016年01期

7 賈小儉;郝少東;杜艷麗;張民照;覃曉春;王進忠;王海香;冀衛(wèi)榮;;桃蛀螟性信息素結合蛋白Cpun-PBP1的cDNA克隆、表達譜及其與配體化合物的結合特性分析[J];昆蟲學報;2015年11期

8 張秀歌;李祥;孫小旭;李思翰;董文霞;;植物揮發(fā)物對蛾類昆蟲性信息素的影響[J];應用昆蟲學報;2015年06期

9 汪宇;孫浩;朱家穎;趙寧;楊斌;;云南切梢小蠹氣味結合蛋白的同源模建[J];應用昆蟲學報;2015年05期

10 曾娟;杜永均;姜玉英;劉萬才;;我國農業(yè)害蟲性誘監(jiān)測技術的開發(fā)和應用[J];植物保護;2015年04期

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉寧燦;張進;王桂榮;劉楊;嚴善春;;棉鈴蟲普通氣味受體基因HarmOR9和HarmOR29的克隆和組織表達分析[J];昆蟲學報;2014年05期

2 孔暢儀;王桂榮;劉楊;嚴善春;;小菜蛾三個普通氣味受體基因的克隆及表達譜[J];中國農業(yè)科學;2014年09期

3 宋月芹;解幸承;董鈞鋒;仵均祥;;梨小食心蟲氣味結合蛋白GmolOBP3的cDNA克隆、表達譜及結合特性分析[J];昆蟲學報;2014年03期

4 劉程程;劉楊;張進;王桂榮;董雙林;;甜菜夜蛾觸角氣味受體基因OR18的克隆和表達定位[J];中國農業(yè)科學;2013年20期

5 樊建庭;孟俊國;Baode Wang;趙莉藺;孫江華;;聚集性信息素和植物源信息素對松墨天牛的聯(lián)合誘捕作用[J];應用昆蟲學報;2013年05期

6 魏丹;葉占峰;高建清;董雙林;;二化螟Minus-C氣味結合蛋白的分子克隆及功能鑒定[J];昆蟲學報;2013年07期

7 紀萍;劉靖濤;谷少華;朱曉強;張永軍;郭予元;;綠盲蝽氣味結合蛋白AlucOBP7的表達及氣味結合特性[J];昆蟲學報;2013年06期

8 陳玲;李紅亮;周宇翔;趙磊;張林雅;倪翠俠;商晗武;;桔小實蠅氣味結合蛋白BdorOBP2的cDNA克隆、組織表達及配基結合特性[J];昆蟲學報;2013年06期

9 李紅亮;張林雅;莊樹林;倪翠俠;韓寶瑜;商晗武;;中華蜜蜂普通氣味結合蛋白ASP2的氣味結合功能模式分析[J];中國農業(yè)科學;2013年01期

10 張瑤;張升祥;路國兵;徐世清;崔為正;;家蠶ABP與ABPX基因定位與表達分析[J];昆蟲學報;2012年08期

【相似文獻】

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1 張小輝;朱忠珂;祁艷霞;;中華蜜蜂氣味結合蛋白5,9,11,12基因克隆及生物信息學分析[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);2010年07期

2 朱家穎;楊璞;吳國星;和秋菊;尹立紅;熊忠平;;麗蠅蛹集金小蜂氣味結合蛋白基因的克隆與序列分析[J];環(huán)境昆蟲學報;2010年04期

3 ;本期重點推介[J];昆蟲學報;2012年05期

4 王桂榮,郭予元,吳孔明;昆蟲觸角氣味結合蛋白的研究進展[J];昆蟲學報;2002年01期

5 吳少英,王桂榮,吳孔明,郭予元,原國輝,郭線茹;煙青蟲氣味結合蛋白基因的克隆與序列分析[J];中國農業(yè)科學;2005年09期

6 孫浩;趙雷修;周凡蕊;高慧;;紫色卷蛾氣味結合蛋白的同源模建[J];農業(yè)災害研究;2013年04期

7 鐘濤;尹姣;劉懷;王進軍;李克斌;韋永貴;曹雅忠;;草地螟觸角普通氣味結合蛋白基因的克隆及序列分析[J];植物保護;2008年04期

8 劉剛;;棉鈴蟲煙青蟲分散產卵習性與氣味結合蛋白有關[J];農藥市場信息;2012年11期

9 張升祥;徐世清;王更先;周曉玲;王桂花;崔為正;;家蠶普通氣味結合蛋白基因的表達及分子進化研究[J];蠶業(yè)科學;2010年04期

10 張瑤;張升祥;崔為正;;家蠶嗅覺相關蛋白質的研究進展[J];蠶業(yè)科學;2008年02期

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1 龔達平;張輝潔;趙萍;夏慶友;向仲懷;;家蠶氣味結合蛋白基因家族[A];中國蠶學會第六屆青年學術研討會論文集（1）[C];2009年

2 范佳;Sophie Vandermoten;Frederic Francis;劉勇;陳巨蓮;程登發(fā);;特異結合EβF的氣味結合蛋白在蚜蟲及其天敵等6種昆蟲中的表達[A];植�？萍紕�(chuàng)新與病蟲防控專業(yè)化——中國植物保護學會2011年學術年會論文集[C];2011年

3 范蔭蔭;李為爭;原國輝;;昆蟲嗅覺分子機理的研究進展[A];華中昆蟲研究（第八卷）[C];2012年

4 王滿V

本文編號：2734759