發(fā)布時(shí)間：2020-04-14 02:57

【摘要】："魯保一號(hào)"菌劑對(duì)雜草菟絲子生防效果良好,但是受制于菌種退化問題其進(jìn)一步應(yīng)用受到限制。本研究通過對(duì)"魯保一號(hào)"菌的生物學(xué)性狀進(jìn)行分析,明確其菌種培養(yǎng)特性:最佳培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基,最佳培養(yǎng)溫度為25~28℃,最佳培養(yǎng)pH值為5~8。同時(shí),利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行"魯保一號(hào)"菌株轉(zhuǎn)化,并初步構(gòu)建了約含2300個(gè)陽性轉(zhuǎn)化子的T-DNA插入突變體庫。轉(zhuǎn)化子經(jīng)連續(xù)繼代6次培養(yǎng)后潮霉素B抗性穩(wěn)定,隨機(jī)挑取的20個(gè)轉(zhuǎn)化子均能PCR克隆出潮霉素基因,轉(zhuǎn)化子是由T-DNA插入引起的,且篩選抗性能夠穩(wěn)定遺傳。以上研究為后期篩選獲得致病力穩(wěn)定的遺傳改良菌株,并進(jìn)一步應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

直徑不存在顯著差異。但是，綜上分析菌絲重量和分圖１“魯保一號(hào)”菌株菌落與分生孢子Ｆｉｇ．１ＣｏｌｏｎｙａｎｄｃｏｎｉｄｉａｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎＡ：“魯保一號(hào)”菌落ＣｏｌｏｎｙｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ；Ｂ：分生孢子ＣｏｎｉｄｉａｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ．生孢子產(chǎn)量等因素，ＰＤＡ培養(yǎng)基為最適合“魯保一號(hào)”菌株生長和產(chǎn)孢的培養(yǎng)基，培養(yǎng)１０ｄ后其產(chǎn)孢量達(dá)到２８５．４×１０９個(gè)孢子／皿左右，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他真菌培養(yǎng)基。２．２．２溫度對(duì)“魯保一號(hào)”菌生長的影響以ＰＤＡ為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，研究７個(gè)溫度梯度下“魯保一號(hào)”菌株生長狀況。由表２可以看出，綜合分析菌落直徑和分生孢子產(chǎn)量，菌株在２５和２８℃培養(yǎng)條件下生長最好，而當(dāng)溫度低于２５℃時(shí)或高于２８℃時(shí)菌落直徑和產(chǎn)孢量均顯著下降，而相對(duì)高溫（大于２８℃）對(duì)于菌株生長的影響更大。圖２“魯保一號(hào)”菌系統(tǒng)發(fā)育樹分析Ｆｉｇ．２ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ２．２．３ｐＨ值對(duì)“魯保一號(hào)”菌生長的影響由表３圖３“魯保一號(hào)”菌株在潮霉素Ｂ濃度梯度培養(yǎng)基上的耐受實(shí)驗(yàn)Ｆｉｇ．３ＴｏｌｅｒａｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｔｈｅＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎｏｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｏｆｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ可以看出，“魯保一號(hào)”菌其適應(yīng)范圍較廣，在ｐＨ值３～１０上均能生長，其中在ｐＨ４～９下菌落直徑不存在顯著差異。結(jié)合產(chǎn)孢量分析，“魯保一號(hào)”菌最適ｐＨ值為５～８，在該范圍內(nèi)其菌落直徑和產(chǎn)孢量均相近

培養(yǎng)基為最適合“魯保一號(hào)”菌株生長和產(chǎn)孢的培養(yǎng)基，培養(yǎng)１０ｄ后其產(chǎn)孢量達(dá)到２８５．４×１０９個(gè)孢子／皿左右，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其他真菌培養(yǎng)基。２．２．２溫度對(duì)“魯保一號(hào)”菌生長的影響以ＰＤＡ為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，研究７個(gè)溫度梯度下“魯保一號(hào)”菌株生長狀況。由表２可以看出，綜合分析菌落直徑和分生孢子產(chǎn)量，菌株在２５和２８℃培養(yǎng)條件下生長最好，而當(dāng)溫度低于２５℃時(shí)或高于２８℃時(shí)菌落直徑和產(chǎn)孢量均顯著下降，而相對(duì)高溫（大于２８℃）對(duì)于菌株生長的影響更大。圖２“魯保一號(hào)”菌系統(tǒng)發(fā)育樹分析Ｆｉｇ．２ＰｈｙｌｏｇｅｎｅｓｉｓａｎａｌｙｓｉｓｏｆＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎ２．２．３ｐＨ值對(duì)“魯保一號(hào)”菌生長的影響由表３圖３“魯保一號(hào)”菌株在潮霉素Ｂ濃度梯度培養(yǎng)基上的耐受實(shí)驗(yàn)Ｆｉｇ．３ＴｏｌｅｒａｎｃｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｏｆｔｈｅＬｕｂａｏＮｏ．１ｓｔｒａｉｎｏｎｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｇｒａｄｉｅｎｔｏｆｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢ可以看出，“魯保一號(hào)”菌其適應(yīng)范圍較廣，，在ｐＨ值３～１０上均能生長，其中在ｐＨ４～９下菌落直徑不存在顯著差異。結(jié)合產(chǎn)孢量分析，“魯保一號(hào)”菌最適ｐＨ值為５～８，在該范圍內(nèi)其菌落直徑和產(chǎn)孢量均相近。而當(dāng)培養(yǎng)基ｐＨ＜５和ｐＨ＞８時(shí)其分生孢子產(chǎn)量顯著降低。２．３Ｔ－ＤＮＡ插入突變體庫的構(gòu)建２．３．１“魯保一號(hào)”菌株對(duì)潮霉素Ｂ的耐受性選勸魯保一號(hào)”菌株為材料，在含不同潮霉素Ｂ濃度的ＰＤＡ培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果表明（圖３），在潮霉素Ｂ濃度為２５０μｇ／ｍＬ的培養(yǎng)基上，接種的分生孢子不

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1 ;“魯保一號(hào)”菌劑土法生產(chǎn)和應(yīng)用[J];湖北農(nóng)業(yè)科技;1972年02期

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6 高昭遠(yuǎn),干靜娥,溫慶英;性狀穩(wěn)定的魯保一號(hào)菌變異株[J];植物保護(hù);1984年03期

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10 高昭遠(yuǎn),干靜娥;菟絲子的生物防除——“魯保一號(hào)”的研究進(jìn)展[J];生物防治通報(bào);1992年04期

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