本文選題：蝗綠僵菌　切入點(diǎn)：幾丁質(zhì)合成酶家族　出處：《重慶大學(xué)》2015年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：隨著現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,有關(guān)昆蟲(chóng)病原真菌致病機(jī)理的研究越來(lái)越深入�；染G僵菌是目前研究比較廣的一類(lèi)昆蟲(chóng)病原真菌,可以作為研究昆蟲(chóng)病原真菌的模式生物。幾丁質(zhì)是真菌細(xì)胞壁的重要組成部分,幾丁質(zhì)合成的關(guān)鍵酶是幾丁質(zhì)合酶(CHS)。在絲狀真菌中,幾丁質(zhì)合成酶家族基因分為七類(lèi)。目前,有關(guān)昆蟲(chóng)病原真菌幾丁質(zhì)合成酶家族基因的研究還未見(jiàn)報(bào)道。所以本研究以昆蟲(chóng)病原真菌蝗綠僵菌為研究對(duì)象,研究蝗綠僵菌幾丁質(zhì)合成酶家族基因Ma Chs,闡明Ma Chs家族各基因在蝗綠僵菌抗逆和侵染致病過(guò)程中的作用。本研究的主要研究結(jié)果如下:①蝗綠僵菌Ma Chs家族有七個(gè)基因,分別命名為Ma Chs I、Ma Chs II、Ma Chs III、Ma Chs IV、Ma Chs V、Ma Chs VI、Ma Chs VII。②通過(guò)q RT-PCR測(cè)定Ma Chs家族各基因在侵染過(guò)程中的表達(dá)量。除5天蟲(chóng)菌體中Ma Chs VII表達(dá)量最高,其余各時(shí)期均是Ma Chs III相對(duì)表達(dá)量最高,Ma Chs VI在各時(shí)期相對(duì)表達(dá)量最低;比較同一基因在不同時(shí)期的表達(dá)量,Ma Chs II在附著胞時(shí)期相對(duì)表達(dá)量最高,其他各基因均在孢子時(shí)期相對(duì)表達(dá)量最高。③在1/4SDAY固體培養(yǎng)基加入各種逆境,ΔMa Chs III、ΔMa Chs V在CR、CFW和H2O2條件下,長(zhǎng)勢(shì)弱于野生型,ΔMa Chs VII在CR、CFW、H2O2、SDS、SOR、Na Cl逆境及1/4SDAY空白對(duì)照中長(zhǎng)勢(shì)均弱于野生型,其他敲除菌株在逆境下與野生型沒(méi)有差異。敲除Ma Chs II、Ma Chs III、Ma Chs IV、Ma Chs V和Ma Chs VI影響蝗綠僵菌對(duì)濕熱的敏感性,敲除Ma Chs II、Ma Chs IV、Ma Chs VI影響蝗綠僵菌對(duì)紫外的敏感性,ΔMa Chs I對(duì)紫外濕熱的敏感性與野生型無(wú)差異。④分析Ma Chs家族各基因?qū)染G僵菌產(chǎn)孢量和萌發(fā)的影響。結(jié)果顯示,除ΔMa Chs I外,其他敲除菌株產(chǎn)孢量均比野生型低,其中ΔMa Chs VII產(chǎn)孢量急劇降低。統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率顯示ΔMa Chs I、ΔMa Chs IV萌發(fā)中時(shí)延遲;ΔMa Chs II、ΔMa Chs III、ΔMa Chs V萌發(fā)中時(shí)提前,ΔMa Chs VI萌發(fā)中時(shí)與野生型相比沒(méi)有顯著差異。⑤通過(guò)點(diǎn)滴和注射分析各基因敲除后對(duì)蝗綠僵菌毒力的影響。結(jié)果顯示ΔMa Chs III點(diǎn)滴和注射接種蝗蟲(chóng),毒力均降低。研究發(fā)現(xiàn),ΔMa Chs V注射毒力升高,ΔMa Chs VII注射毒力喪失,其余各基因?qū)染G僵菌毒力沒(méi)有影響。⑥通過(guò)透射電鏡觀(guān)察Ma Chs家族各基因敲除后對(duì)蝗綠僵菌細(xì)胞壁的影響,結(jié)果顯示敲除菌株細(xì)胞壁與野生型有一定的差異,敲除菌株細(xì)胞壁變厚。
[Abstract]:With the development of modern molecular biology technology, the pathogenic mechanism of entomopathogenic fungi has been studied more and more deeply. Metarhizium anisopliae is a kind of insect pathogenic fungi. It can be used as a model organism to study entomopathogenic fungi. Chitin is an important part of the cell wall of fungi, and the key enzyme for chitin synthesis is chitin synthase (CHS). In filamentous fungi, the genes of chitin synthase family are classified into seven categories. Studies on chitinase family genes of entomopathogenic fungi have not been reported. To study the genes of chitin synthase family of Metarhizium anisopliae Ma, and to elucidate the role of Ma Chs family genes in the process of resistance to stress and infection and pathogenicity of Metarhizium anisopliae. The main results of this study are as follows: 1. There are seven genes in the Ma Chs family of Metarhizium anisopliae. They were named as Ma Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs, Chs VII.2, respectively. The expression of Ma Chs VII in the Ma Chs family was determined by Q RT-PCR, except for 5 days, the highest expression was found in Ma Chs VII. The highest relative expression of Ma Chs III and the lowest relative expression of Ma Chs VI were observed in other periods, and the highest relative expression of Ma Chs II was observed at different stages. The relative expression of other genes was highest in spore stage. 3. 3. All the stresses were added to 1/4SDAY solid medium. 螖 Ma Chs III, 螖 Ma Chs V were weaker than wild type in CRF CFW and H2O2, and 螖 Ma Chs VII were weaker than wild type in CRT CFW H 2O 2 SDSS-SORN NaCl stress and 1/4SDAY blank control. Other knockout strains had no difference from wild type under stress. Knockout of Ma Chs III Chs Ma Chs IVP Ma Chs V and Ma Chs VI affected susceptibility of Metarhizium anisopliae to moisture and heat. Knockout Ma Chs II, Ma Chs IVF Ma Chs VI affected the UV sensitivity of Metarhizium anisopliae. There was no difference between the sensitivity of 螖 Ma Chs I to ultraviolet dampness heat and wild type. 4. The effect of Ma Chs family genes on sporulation and germination of Metarhizium anisopliae was analyzed. The results showed that, except for 螖 Ma Chs I, there was no difference between the two genes. The sporulation of other knockout strains was lower than that of wild type. The spore production of 螖 Ma Chs VII decreased sharply. The statistical germination rate showed that the germination time of 螖 Ma Chs I, 螖 Ma Chs IV was delayed, that of 螖 Ma Chs II, 螖 Ma Chs III, 螖 Ma Chs V was earlier, and there was no significant difference between 螖 Ma Chs VI and wild type. The effect of gene knockout on the virulence of Metarhizium anisopliae was analyzed. The results showed that 螖 Ma Chs III was given by drip and inoculated with locust. The virulence of 螖 Ma Chs V was increased, and the toxicity of 螖 Ma Chs VII was lost. The other genes had no effect on the virulence of Metarhizium anisopliae by transmission electron microscope (TEM). The effect on the cell wall of Metarhizium anisopliae was observed after the gene knockout of Ma Chs family. The results showed that the cell wall of the knockout strain was different from that of the wild type, and the cell wall of the knockout strain became thicker.
【學(xué)位授予單位】：重慶大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S476.12

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本文編號(hào)：1648743