本文關(guān)鍵詞： 綠僵菌 分生孢子 iTRAQ 蛋白質(zhì)組　出處：《安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：作為一種絲狀真菌,綠僵菌主要包括有典型的兩種不同生活史時(shí)期——分生孢子和菌絲體。分生孢子作為綠僵菌的無(wú)性繁殖單位,在其繁殖和侵染蟲(chóng)體的過(guò)程中都發(fā)揮重要的角色;菌絲是綠僵菌營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段的營(yíng)養(yǎng)攝取單位。目前,針對(duì)綠僵菌的高通量定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究未見(jiàn)報(bào)道。因此,為了進(jìn)一步提高綠僵菌生物防治的應(yīng)用效果,探索綠僵菌分生孢子中重要且關(guān)鍵的代謝及調(diào)控通路,本研究采用i TRAQ技術(shù)對(duì)羅伯茨綠僵菌的分生孢子(10d)和菌絲(1d,作為對(duì)照)進(jìn)行了高通量定量比較蛋白質(zhì)組研究。主要研究結(jié)果如下:1.蛋白質(zhì)鑒定和定量分析結(jié)果顯示:共計(jì)檢測(cè)鑒定到2129種蛋白質(zhì),約占綠僵菌總蛋白數(shù)的20%左右(2129/10581)。在相對(duì)定量時(shí),以菌絲蛋白樣本為對(duì)照,分析了分生孢子內(nèi)的差異表達(dá)蛋白質(zhì)(當(dāng)?shù)鞍椎呢S度比即差異倍數(shù)達(dá)到1.5倍以上,且經(jīng)統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)其p-value值小于0.05時(shí),視該蛋白為不同樣品間的差異表達(dá)蛋白),得到239種差異表達(dá)蛋白,其中184種蛋白在孢子內(nèi)表達(dá)上調(diào),55種蛋白表達(dá)下調(diào)(均是與菌絲相比較)。這些差異表達(dá)的蛋白質(zhì)種類(lèi)主要包括關(guān)鍵代謝途徑中的酶類(lèi)和一般(氧化)應(yīng)激反應(yīng)蛋白質(zhì),例如過(guò)敏原Alt a 7蛋白(minor allergen Alt a 7,EFZ03492)、熱激蛋白70(heat shock protein 70-like protein,EFZ01368)和類(lèi)枯草桿菌蛋白酶PR1H(subtilisin-like protease PR1H,EFY94277),以及參與生物合成和能量代謝的主要蛋白質(zhì)。2.針對(duì)本研究鑒定到的所有蛋白質(zhì)進(jìn)行COG(cluster of orthologous group)注釋分類(lèi)分析,結(jié)果顯示:所有鑒定到的蛋白質(zhì)主要集中于7個(gè)功能類(lèi)別,涉及能量產(chǎn)生和轉(zhuǎn)換(energy production and conversion),氨基酸運(yùn)輸和代謝(amino acid transport and metabolism),碳水化合物的運(yùn)輸和代謝(carbohydrate transport and metabolism)等;這些結(jié)果表明分生孢子和菌絲內(nèi)的蛋白質(zhì)主要參與快速生長(zhǎng)和基礎(chǔ)生物合成代謝這兩種生物學(xué)過(guò)程。3.針對(duì)顯著差異表達(dá)的239種蛋白,進(jìn)行了GO(Gene Ontology)富集分析,結(jié)果顯示,這些蛋白所涉及的主要生物學(xué)功能(molecular functional)表現(xiàn)為催化活性、結(jié)合活性、電子載體活性、結(jié)構(gòu)分子活性和酶活性調(diào)節(jié)。根據(jù)生物學(xué)過(guò)程(biological process)分類(lèi),差異蛋白的種類(lèi)主要分布于代謝過(guò)程、細(xì)胞過(guò)程、單生物過(guò)程、生物調(diào)節(jié)和應(yīng)激反應(yīng)中。此外,根據(jù)細(xì)胞成分(cellular components)分類(lèi),239種蛋白質(zhì)存在于如細(xì)胞、細(xì)胞器、大分子復(fù)合物和細(xì)胞膜等各種細(xì)胞成分中�？偟膩�(lái)說(shuō),這些結(jié)果表明了基因表達(dá)的調(diào)控和代謝通路在分生孢子和菌絲之間呈現(xiàn)顯著的動(dòng)態(tài)變化,顯示了綠僵菌分生孢子和菌絲體之間多個(gè)生物過(guò)程的生理、生化和形態(tài)差異。4.針對(duì)顯著差異表達(dá)的239種蛋白,進(jìn)一步進(jìn)行了KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)富集分析,結(jié)果顯示約60%(4/7)顯著富集的通路參與相關(guān)的降解過(guò)程,包括苯乙烯降解(ko00643),苯乙烷降解(ko00642),香葉醇降解(ko00281),纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解(ko00280)。另外三個(gè)顯著富集通路是不同環(huán)境中微生物的新陳代謝通路(ko01120)、氰基氨基酸代謝(ko00460)和泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)水解(ko04120)。特別值得注意的,苯乙烯降解、苯乙烷降解、香葉醇降解三種代謝通路主要涉及次生代謝,而這些次生代謝產(chǎn)物參與抑制分生孢子萌發(fā),即分生孢子中富含一些蛋白能夠消除分生孢子萌發(fā)的抑制現(xiàn)象;與此同時(shí),由以上四種降解代謝途徑結(jié)合氰基氨基酸代謝可能會(huì)提供更多的碳源和氮源,為孢子萌發(fā)提供基礎(chǔ)代謝支持。此外,與抗逆境脅迫相關(guān)的蛋白顯著富集于泛素介導(dǎo)的蛋白質(zhì)水解通路,這個(gè)結(jié)果表明,在特定條件下,分生孢子主要通過(guò)清除受損蛋白來(lái)抵抗逆境壓迫,而不是復(fù)性受損蛋白。綜上所述,本研究結(jié)果深入地闡釋了分生孢子和菌絲體的生物學(xué)過(guò)程差異以及絲狀真菌不同階段的表型差異的蛋白質(zhì)表達(dá)因素,加深了我們對(duì)于羅伯茨綠僵菌分生孢子和菌絲蛋白質(zhì)組的理解,同時(shí)也為提高綠僵菌作為生物防治制劑防治效果的深入研究提供了基礎(chǔ)。
[Abstract]:In order to further improve the application of biological control of Metarhizium anisopliae , there were 239 kinds of differential expression proteins . According to biological process , 239 kinds of proteins were mainly distributed in metabolic process , cell process , single biological process , biological regulation and stress response . In conclusion , it is possible to provide more carbon and nitrogen sources to inhibit the germination of conidium . In the meantime , it is possible to provide more carbon sources and nitrogen sources for spore germination .

【學(xué)位授予單位】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S476.12

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 YANG Wen-Zhi;WU Wan-Ying;YANG Min;GUO De-An;;Elucidation of the fragmentation pathways of a complex 3,7-O-glycosyl flavonol by CID, HCD, and PQD on an LTQ-Orbitrap Velos Pro hybrid mass spectrometer[J];Chinese Journal of Natural Medicines;2015年11期

2 楊華;楊恩蘭;張功營(yíng);萬(wàn)樹(shù)青;;綠僵菌防治煙田主要害蟲(chóng)的研究進(jìn)展與展望[J];中國(guó)煙草科學(xué);2015年05期

3 李增智;;我國(guó)利用真菌防治害蟲(chóng)的歷史、進(jìn)展及現(xiàn)狀[J];中國(guó)生物防治學(xué)報(bào);2015年05期

4 李云鋒;聶燕芳;王振中;;植物病原真菌分泌蛋白質(zhì)組學(xué)研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)通報(bào);2015年06期

5 馬首智;孫玉琳;趙曉航;徐平;;高精度相對(duì)和絕對(duì)定量的等量異位標(biāo)簽在定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的新進(jìn)展[J];生物工程學(xué)報(bào);2014年07期

6 尹穩(wěn);伏旭;李平;;蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通報(bào);2014年01期

7 宋春俠;孫珍;秦洪強(qiáng);葉明亮;張麗華;張玉奎;鄒漢法;;修飾蛋白質(zhì)組學(xué)分離鑒定新技術(shù)新方法[J];科學(xué)通報(bào);2013年30期

8 Yanli Liu;Ming Li;Chao Han;Fengxia Wu;Bingkun Tu;Pingfang Yang;;Comparative Proteomic Analysis of Rice Shoots Exposed to High Arsenate[J];Journal of Integrative Plant Biology;2013年10期

9 張瑩;楊們?cè)?陸豪杰;;基于多級(jí)質(zhì)譜的蛋白質(zhì)組定量新方法新技術(shù)進(jìn)展[J];色譜;2013年06期

10 武鵬;賀福初;姜穎;;定量蛋白質(zhì)組學(xué)無(wú)標(biāo)記定量方法的研究進(jìn)展[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2013年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 齊永霞;白僵菌和綠僵菌在植物根際的定殖及對(duì)幾種土傳植物病原真菌的抑制作用研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 夏龍蓀;白僵菌和綠僵菌對(duì)幾種植物病原真菌的拮抗作用研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：1508715