本文關(guān)鍵詞：表達(dá)人CD47基因的巴馬小型豬創(chuàng)建及其表達(dá)分析

  更多相關(guān)文章： 整合素相關(guān)蛋白(CD) 異種移植 巨噬細(xì)胞 表達(dá)特征 巴馬小型豬

【摘要】：異種器官移植是解決供體器官短缺的有效途徑之一,豬(Sus scrofa)是人類(Homo sapiens)異種器官移植的理想供體。然而,異種移植物進(jìn)入受體后將被受體巨噬細(xì)胞清除,其主要原因是巨噬細(xì)胞表面的受體-信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白α(singal regulatory proteinα,SIRPα)不能特異地識(shí)別異種細(xì)胞表面的整合素相關(guān)蛋白(integrin associated protein,IAP又稱CD47),導(dǎo)致移植物細(xì)胞被受體內(nèi)的巨噬細(xì)胞吞噬并清除。本研究在敲除α-1,3-半乳糖基轉(zhuǎn)移酶基因(α-1,3-galactosyltransferase knockout,GTKO)的巴馬小型豬基礎(chǔ)上,轉(zhuǎn)入h CD47基因,制備表達(dá)h CD47基因的GTKO/h CD47巴馬小型豬,可避免超急性排斥反應(yīng)并減弱受體巨噬細(xì)胞對(duì)移植物細(xì)胞的吞噬。首先構(gòu)建巨細(xì)胞病毒增強(qiáng)子和雞β肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子(cytomegalovirus early enhancer/chickenβ-actin promoter,CAG)調(diào)控的h CD47基因表達(dá)載體p CAGGS-h CD47-Neo,轉(zhuǎn)染GTKO巴馬小型豬的耳成纖維細(xì)胞,然后通過體細(xì)胞克隆技術(shù)制備轉(zhuǎn)基因克隆豬。利用PCR對(duì)克隆仔豬進(jìn)行轉(zhuǎn)基因鑒定,通過q RT-PCR、Western blot和免疫組化等方法分析h CD47在轉(zhuǎn)基因豬的心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、胰腺等組織的表達(dá)。抽取存活仔豬血液進(jìn)行生理指標(biāo)檢測(cè),監(jiān)測(cè)其健康狀況。通過體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得了13頭轉(zhuǎn)基因克隆豬,PCR鑒定均為h CD47基因陽(yáng)性豬。q RT-PCR結(jié)果顯示,h CD47基因在各器官中的表達(dá)量由高至低依次為胰腺、肝臟、肺臟、脾臟、腎臟和心臟。Western blot及免疫組化結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)h CD47基因在胰腺、肝臟等中均具有較強(qiáng)表達(dá),與q RT-PCR結(jié)果一致。血液生理指標(biāo)顯示,存活仔豬健康狀況良好。本研究成功制備了表達(dá)h CD47基因的GTKO巴馬小型豬,確證了h CD47基因在主要器官中的表達(dá)特征,將有助于探究h CD47基因在減弱受體巨噬細(xì)胞對(duì)異種移植各器官的排斥反應(yīng)。
【作者單位】： 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所/農(nóng)業(yè)部畜禽遺傳資源與種質(zhì)創(chuàng)新重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 整合素相關(guān)蛋白(CD) 異種移植 巨噬細(xì)胞 表達(dá)特征 巴馬小型豬
【基金】：國(guó)家科技重大專項(xiàng)(No.2014ZX0801203B-002) 國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展規(guī)劃(973)項(xiàng)目(No.2015CB554103)
【分類號(hào)】：S865.1;R617
【正文快照】：

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 潘登科;張莉;周艷榮;馮沖;龍川;劉曉;董恩球;王樹臣;萬榮;張健;陳紅星;;體細(xì)胞核移植生產(chǎn)轉(zhuǎn)ω-3脂肪酸去飽和酶基因sFat-1克隆豬[J];中國(guó)科學(xué)(C輯:生命科學(xué));2009年03期

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【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李西睿;馮沖;龍川;紀(jì)慧麗;魏靜;石寧寧;曾國(guó)敏;蔣應(yīng)弟;潘登科;田興華;;CRISPR/Cas9介導(dǎo)的ASGR1基因敲除豬制備[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2016年08期

2 曾國(guó)敏;蔣應(yīng)弟;馮沖;石寧寧;龍川;李西睿;魏靜;紀(jì)慧麗;潘登科;劉霞;;表達(dá)人CD47基因的巴馬小型豬創(chuàng)建及其表達(dá)分析[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2016年08期

3 張茂;張冠冠;劉德武;蔡更元;吳珍芳;李紫聰;;轉(zhuǎn)β-甘露聚糖酶基因克隆豬的制備與分析[J];中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué);2016年08期

4 丁言偉;周大鵬;史o偪，

本文編號(hào)：941294