天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

當(dāng)前位置:主頁(yè) > 科技論文 > 基因論文 >

山羊源奇異變形桿菌的分離鑒定及其主要毒力基因的檢測(cè)

發(fā)布時(shí)間:2017-09-22 17:33

  本文關(guān)鍵詞:山羊源奇異變形桿菌的分離鑒定及其主要毒力基因的檢測(cè)


  更多相關(guān)文章: 山羊 奇異變形桿菌 腹瀉 毒力因子 藥敏試驗(yàn) 耐藥性 致病性


【摘要】:奇異變形桿菌(Proteus mirabilis,PM)是一種人畜均可感染的條件性致病菌,感染宿主范圍廣,山羊、豬、雞、犢牛、狐貍、獼猴、水貂、鴿子、各種魚類等多種畜禽和野生動(dòng)物均可感染。PM可引起人的食物中毒和尿道感染,而感染其他動(dòng)物上會(huì)發(fā)生不同的疾病,主要有腹瀉、創(chuàng)傷感染,也有中耳炎、腹膜炎、腦膜炎的報(bào)道。PM屬于兼性厭氧菌,并且對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求不高,低溫條件下也可繁殖,極易對(duì)動(dòng)物性食品造成污染,引起人的食物中毒,具有十分重要的衛(wèi)生學(xué)意義。但直到本世紀(jì)70年代末期,PM對(duì)動(dòng)物的致病性才受到研究者的關(guān)注,從病原學(xué)、流行病學(xué)等方面做了不同程度的研究。近幾年,我國(guó)奇異變形桿菌感染人和動(dòng)物的報(bào)道呈上升的趨勢(shì),對(duì)于畜禽養(yǎng)殖業(yè)和人的健康安全造成了極大的危害。山羊腹瀉是臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病,導(dǎo)致山羊腹瀉的因素有很多,其中細(xì)菌、病毒和寄生蟲感染是引起山羊腹瀉的主要原因。本實(shí)驗(yàn)室在前期對(duì)成都某羊場(chǎng)的腹瀉山羊進(jìn)行了病原檢測(cè),發(fā)現(xiàn)奇異變形桿菌與山羊腹瀉有密切關(guān)系。但目前國(guó)內(nèi)外對(duì)山羊源奇異變形桿菌的病原學(xué)研究資料甚少,為深入了解其生物學(xué)特性,為有效控制其感染提供科學(xué)依據(jù),本研究對(duì)山羊源奇異變形桿菌進(jìn)行分離鑒定、對(duì)其部分生物學(xué)特征進(jìn)行了研究,并對(duì)PM部分毒力基因進(jìn)行PCR檢測(cè),取得如下結(jié)果。1山羊源PM的分離鑒定 1.1山羊源PM的培養(yǎng)特性、染色及形態(tài)從四川5個(gè)地區(qū)青白江、簡(jiǎn)陽(yáng)、西昌、攀枝花、北川等地7個(gè)羊場(chǎng)采集腹瀉和健康山羊糞便棉拭子各140份,分別接種于BPW中37℃預(yù)增菌培養(yǎng)12h,轉(zhuǎn)種于SC增菌液,37℃培養(yǎng)18h,最后轉(zhuǎn)接種于SS瓊脂培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)12h。在SS瓊脂培養(yǎng)基上可見(jiàn)光滑、扁平有黑色中心的透明或半透明圓形大菌落,在lb平板上可見(jiàn)典型的“遷徙”生長(zhǎng)現(xiàn)象,細(xì)菌呈擴(kuò)散狀生長(zhǎng)。挑選疑似菌落革蘭氏染色鏡檢,可見(jiàn)革蘭氏陰性中等大小的桿菌,無(wú)莢膜,不形成芽孢。1.2pcr鑒定挑選疑似菌落接種lb培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)12h,用酚氯仿法提取總dna,采用靶向奇異變形桿菌脲酶調(diào)節(jié)因子(urer)的引物,擴(kuò)增其225bp的特異片段,隨機(jī)挑選5個(gè)陽(yáng)性擴(kuò)增產(chǎn)物膠回收,連接t載體并測(cè)序,證實(shí)為pm特異片段。共鑒定出pm41株,其中從腹瀉山羊糞便樣本中檢出31株(31/140),從健康山羊糞便中檢出10株(10/140)。用spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,腹瀉樣本中pm的檢出率顯著高于健康糞便樣本(p=0.02)。由此可見(jiàn)pm與山羊腹瀉關(guān)系密切。2山羊源pm的耐藥性檢測(cè)采用k-b法檢測(cè)20株山羊源pm對(duì)青霉素類、磺胺類、喹諾酮類、氨基糖苷類、頭孢類、β-內(nèi)酰胺類等6大類共15種常用抗菌藥物(鏈霉素、復(fù)方新諾明、諾氟沙星、萘啶酸、頭孢吡肟、頭孢噻吩、阿莫西林、氨芐西林、慶大霉素、卡那霉素、左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、頭孢曲松、頭孢他啶和阿米卡星)的抗性。結(jié)果顯示:20株被檢pm分離株對(duì)上述藥物的耐藥率分別為30%、35%、15%、100%、100%、85%、100%、40%、90%、100%、100%、100%、95%、100%、100%。耐藥譜為9~13耐,說(shuō)明山羊pm的耐藥性十分嚴(yán)重,且不同地區(qū)山羊奇異變形桿菌的耐藥譜和耐藥率差異顯著(攀枝花地區(qū)普遍對(duì)青霉素類耐藥,簡(jiǎn)陽(yáng)地區(qū)普遍對(duì)β-內(nèi)酰胺類耐藥),這與不同地區(qū)羊場(chǎng)的用藥習(xí)慣有關(guān)。因此,定期開(kāi)展藥敏試驗(yàn),能為山羊pm感染的預(yù)防和治療提供可靠的用藥指導(dǎo)。3山羊源pm的致病性隨機(jī)挑選5株(編號(hào)pm1~pm5)從山羊腹瀉糞便中分離的pm,分別接種于lb肉湯,37℃培養(yǎng)12h,采用比濁法計(jì)數(shù),調(diào)整菌液濃度至5×108cfu/ml,腹腔注射2月齡雌性spf昆系小鼠,0.2ml/只,每個(gè)菌株接種5只小鼠,同時(shí)設(shè)5只空白對(duì)照,以滅菌生理鹽水代替肉湯培養(yǎng)物,各組小鼠隔離飼養(yǎng),自由采食和飲水,密切觀察并紀(jì)錄小鼠發(fā)病及死亡情況。結(jié)果顯示:空白組5只小鼠在整個(gè)試驗(yàn)期間健康狀態(tài)良好。而5個(gè)PM感染組小鼠在8h左右均出現(xiàn)精神沉郁、反應(yīng)遲鈍,閉目蜷縮、扎堆顫抖等癥狀,10 h開(kāi)始出現(xiàn)死亡,24 h內(nèi)全部死亡。死亡小鼠剖檢均可見(jiàn)腸管出現(xiàn)明顯的充盈、膨脹、腸道內(nèi)充滿黃色粥樣稀液內(nèi)容物,脾臟出現(xiàn)程度不同的腫脹,心臟、肝臟等其他實(shí)質(zhì)器官未見(jiàn)明顯病變。上述結(jié)果說(shuō)明,腹腔接種PM對(duì)小鼠具有較強(qiáng)的致病性。4山羊源PM主要毒力因子的檢測(cè)研究和鑒定細(xì)菌的毒力基因是研究其感染與致病機(jī)理的重要研究?jī)?nèi)容。本研究選取尿素酶的功能亞單位編碼的ureC基因、由金屬蛋白酶的主要功能亞單位編碼的zapA基因、由MPR菌毛主要結(jié)構(gòu)亞單位編碼的mrpA基因、由尿道上皮粘附素結(jié)構(gòu)亞單位編碼的ucaA基因、由“霧蔓”遷徙能力的調(diào)節(jié)基因編碼的rsbA基因、由Pmf菌毛主要結(jié)構(gòu)亞單位編碼的pmfA基因、由適溫菌毛結(jié)構(gòu)亞單位編碼的atfA基因、由適溫菌毛合成的分子引物編碼的atfC基因等8個(gè)毒力基因,參照文獻(xiàn)報(bào)道分別合成這8個(gè)毒力基因的引物,PCR分別檢測(cè)8個(gè)毒力基因在10株分自健康山羊糞便樣本和20株來(lái)自腹瀉山羊糞便的PM的攜帶情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):ureC基因在健康山羊和腹瀉山羊PM分離株的攜帶率分別為60%(6/10)和80%(16/20);zap A基因在健康山羊和腹瀉山羊PM分離株的攜帶率分別為50%(5/10),和85%(17/20),經(jīng)過(guò)spss軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,2個(gè)基因在健康山羊和腹瀉山羊源PM的攜帶率差異顯著(P=0.04、0.02)。而mrpA、ucaA、rsbA、pmfA、atfA、atfC基因在健康和腹瀉山羊中的檢出率無(wú)明顯差異。因此可見(jiàn),PM攜帶的ureC和zapA基因可能與致山羊腹瀉有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】:山羊 奇異變形桿菌 腹瀉 毒力因子 藥敏試驗(yàn) 耐藥性 致病性
【學(xué)位授予單位】:西南民族大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2016
【分類號(hào)】:S852.61
【目錄】:
  • 摘要4-7
  • Abstract7-13
  • 第一篇 文獻(xiàn)綜述 畜禽奇異變形桿菌病的研究進(jìn)展13-20
  • 1 分類地位及形態(tài)特征13-14
  • 2 培養(yǎng)特性14
  • 3 病原性14-15
  • 4 耐藥性15-16
  • 5 分子生物學(xué)特征16-17
  • 5.1 耐藥基因16
  • 5.2 毒力基因16-17
  • 6 流行病學(xué)研究進(jìn)展17-18
  • 6.1 奇異變形桿菌的感染譜17
  • 6.2 傳播途徑17
  • 6.3 臨床癥狀及病理變化17-18
  • 6.4 診斷18
  • 7 問(wèn)題與展望18-20
  • 第二篇 研究報(bào)告20-41
  • 第一章 山羊奇異變形桿菌的分離鑒定及部分生物學(xué)特征研究20-33
  • 1 材料和方法20-23
  • 1.1 樣本采集20
  • 1.2 發(fā)病情況20-21
  • 1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與菌株21
  • 1.4 主要試劑和儀器設(shè)備21
  • 1.5 PM的分離培養(yǎng)21
  • 1.6 菌體形態(tài)和染色特性21
  • 1.7 PCR鑒定21-22
  • 1.8 耐藥表型22
  • 1.9 致病性試驗(yàn)22-23
  • 1.9.1 菌液的準(zhǔn)備22-23
  • 1.9.2 動(dòng)物接種23
  • 2 結(jié)果23-30
  • 2.1 PM的培養(yǎng)特征23-24
  • 2.2 PM的形態(tài)及染色特征24-25
  • 2.3 PCR鑒定結(jié)果25-26
  • 2.4 PM的耐藥表型26-29
  • 2.5 PM對(duì)小鼠的致病性29-30
  • 3 討論30-33
  • 第二章 山羊奇異變形桿菌8種毒力因子的分布研究33-41
  • 1 材料與方法33-35
  • 1.1 菌株33
  • 1.2 主要試劑33
  • 1.3 主要儀器33-34
  • 1.4 引物設(shè)計(jì)與合成34
  • 1.5 PM DNA的提取34-35
  • 1.6 PCR擴(kuò)增PM毒力基因35
  • 2 結(jié)果35-39
  • 2.1 山羊毒力因子的PCR擴(kuò)增結(jié)果35-38
  • 2.2 山羊PM毒力基因的分布38-39
  • 3 討論39-41
  • 結(jié)論與創(chuàng)新點(diǎn)41-42
  • 參考文獻(xiàn)42-49
  • 致謝49-50

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 劉艷霞;劉蕾;劉俊康;鄧渝;;低濕度培養(yǎng)誘生變形桿菌復(fù)雜群集運(yùn)動(dòng)增殖生長(zhǎng)模式[J];微生物學(xué)雜志;2011年05期

2 易衛(wèi)東,黃輝,袁澤濤,叢延廣,徐啟旺;奇異變形桿菌寄宿波動(dòng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;1999年01期

3 劉蕾;劉艷霞;鄧渝;劉俊康;;同株奇異變形桿菌存在不同生長(zhǎng)狀態(tài)[J];微生物學(xué)雜志;2011年04期

4 高正琴;王春玲;邢進(jìn);賀爭(zhēng)鳴;高翔;邢瑞昌;;鼠奇異變形桿菌的鑒別診斷[J];實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)與管理;2005年04期

5 皇甫和平;宋一然;趙傳壁;;雞源奇異變形桿菌的分離及其16S rRNA基因序列分析[J];鄭州牧業(yè)工程高等?茖W(xué)校學(xué)報(bào);2014年01期

6 徐啟旺,袁澤濤,王源,劉俊康,劉美良;生物波調(diào)控因子生物作用檢測(cè)方法研究[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2000年02期

7 陳輝;俞慕華;黃銳敏;劉楚云;鞠長(zhǎng)燕;;奇異變形桿菌的脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2008年13期

8 孫秋艷;劉紅芹;胡曉娜;路建彪;朱瑞良;;雞奇異變形桿菌的分離、鑒定及流行病學(xué)調(diào)查[J];家畜生態(tài)學(xué)報(bào);2006年06期

9 龐卓;夏曉潮;陳鋒;王建榮;;野生草食動(dòng)物源奇異變形桿菌的耐藥性分析[J];野生動(dòng)物;2010年05期

10 邵芹;;雞奇異變形桿菌病的診治[J];科技致富向?qū)?2012年19期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 應(yīng)春妹;何澄;汪雅萍;葉楊芹;張灝e,

本文編號(hào):902146


資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://www.sikaile.net/kejilunwen/jiyingongcheng/902146.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶821a6***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要?jiǎng)h除請(qǐng)E-mail郵箱bigeng88@qq.com