本文關(guān)鍵詞：雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)鑒定has-miR-577和has-miR-583對FGF-21基因的靶向調(diào)控

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【摘要】：目的通過構(gòu)建成纖維細(xì)胞生長因子-21基因(fibroblast growth factor 21,FGF-21)熒光素酶報告基因載體,觀察has-miR-577和has-miR-583對FGF-21基因的靶向調(diào)控。方法利用生物學(xué)信息網(wǎng)站對has-miR-577和has-miR-583靶向結(jié)合FGF-21 3′UTR區(qū)的位點進(jìn)行分析,設(shè)計合成包含與has-miR-577和has-miR-583結(jié)合序列及其突變序列的FGF-21基因片段,構(gòu)建野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突變型(psiCHECK2-FGF-21-mut)FGF-21雙熒光素酶報告基因載體。進(jìn)行雙酶切電泳和測序鑒定后,FGF-21野生型與突變型雙熒光素酶報告基因載體分別+〔hsa-miR-577模擬物、hsa-miR-583模擬物和miR無義序列陰性對照(miR negative control,miR-NC)〕轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,檢測熒光素酶活性,觀察has-miR-577和has-miR-583對FGF-21表達(dá)的影響。結(jié)果雙酶切電泳和測序結(jié)果顯示,野生型(psiCHECK2-FGF-21)和突變型(psiCHECK2-FGF-21-mut)基因載體片段大小、序列結(jié)果與實驗預(yù)期一致,載體構(gòu)建成功。has-miR-577和has-miR-583可抑制野生型FGF-21載體的熒光表達(dá)(P0.05),而對突變型FGF-21載體的熒光表達(dá)無抑制作用。結(jié)論 has-miR-577和has-miR-583可以靶向調(diào)控FGF-21的表達(dá)。
【作者單位】： 四川大學(xué)華西醫(yī)院實驗醫(yī)學(xué)科/臨床檢驗醫(yī)學(xué)研究中心;四川大學(xué)華西醫(yī)院內(nèi)分泌代謝科;
【關(guān)鍵詞】： has-miR- has-miR- 雙熒光素酶報告基因 FGF-
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項目(No.81501800)資助
【分類號】：R440
【正文快照】： 成纖維細(xì)胞生長因子-21(fibroblast growthfactor 21,FGF-21)是FGF家族成員之一,由肝臟分泌,與糖脂代謝密切相關(guān),研究顯示,FGF-21具有有治療糖尿病的潛能[1]。微小RNA(microRNA,miRNA)是一組長度在17~25個核苷酸的非編碼小RNA,本課題組通過生物學(xué)軟件發(fā)現(xiàn),FGF-213′UTR區(qū)存在，

本文編號：879565