本文關(guān)鍵詞：多重PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻的轉(zhuǎn)基因成分，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

※分析檢測(cè)食品科學(xué)

2012, Vol. 33, No. 12

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多重PCR檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻的轉(zhuǎn)基因成分

魏 霜1，陳 貞1，蘆春斌2，馬 駿3，白衛(wèi)濱1，吳希陽(yáng)1,*

(1.暨南大學(xué)理工學(xué)院食品科學(xué)與工程系，廣東 廣州 510632；2.暨南大學(xué)生殖免疫研究所，廣東 廣州 510632；

3.廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心，廣東 廣州 510623)

摘　　　要：以水稻內(nèi)源基因SPS、外源抗蟲(chóng)基因Cry1Ab、外源抗蟲(chóng)基因Cry1Ab/Ac、外源抗蟲(chóng)基因Btc、報(bào)告基因GUS、NOS終止子和CaMV35S啟動(dòng)子為檢測(cè)對(duì)象，設(shè)計(jì)7對(duì)引物，通過(guò)優(yōu)化PCR擴(kuò)增體系中不同引物濃度的配比及退火溫度，建立水稻轉(zhuǎn)基因成分的七重PCR檢測(cè)體系。結(jié)果表明：建立的七重PCR體系能有效檢測(cè)出水稻及其他作物(大豆、玉米、棉花籽、菜籽粕)中的轉(zhuǎn)基因成分，檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便、特異性好。關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因檢測(cè)；水稻；七重PCR

Multiplex PCR Detection of Transgenic Components of Genetically Modified Rice

WEI Shuang1，CHEN Zhen1，LU Chun-bin2，MA Jun3，BAI Wei-bin1，WU Xi-yang1,*

(1.Department of Food Science and Engineering, College of Science and Engineering, Jinan University, Guangzhou 510632, China；2. Institute of Reproductive Immunology, Jinan University, Guangzhou 510632, China；3. Inspection and Quarantine Technology

Center, Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Guangzhou 510623, China)

Abstract ：In order to detect transgenic components in genetically modified rice, endogenous gene SPS, exogenous insect resistantgene Cry1Ab/Ac, exogenous insect resistant gene Cry1Ab, exogenous insect resistant gene Btc, reporter gene GUS, NOS terminatorand CaMV35S promoter were evaluated by multiplex polymerase chain reaction. Seven pairs of primers were designed, and primerconcentration and annealing temperature were optimized to establish a multiplex PCR system. The results showed that thedeveloped seven-plex PCR system could allow the detection of transgenic components in genetically modified rice and othercrops including soybean, corn, cottonseeds and rapeseed meal with high efficiency and good stability.Key words：transgenic detection；rice；seven-plex PCR

中圖分類號(hào)：TS207.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1002-6630(2012)12-0159-04

水稻是占全世界50%人口的主糧，自第1批水稻轉(zhuǎn)基因植株在1988年問(wèn)世以來(lái)，許多國(guó)家在水稻轉(zhuǎn)基因研究中取得一系列成果，許多轉(zhuǎn)基因水稻育種材料已經(jīng)進(jìn)入田間試驗(yàn)，并不斷向?qū)嵱没较虬l(fā)展。隨著轉(zhuǎn)基因產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，轉(zhuǎn)基因食品的安全性問(wèn)題受到廣泛關(guān)注，日本、歐盟等許多國(guó)家相繼建立了轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)識(shí)制度[1]。我國(guó)也于2002年3月20日起要求對(duì)5類轉(zhuǎn)基因生物所涉及的17種轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品進(jìn)行標(biāo)識(shí)[2]。

目前對(duì)轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品的檢測(cè)方法主要分為兩類：第1類以導(dǎo)入外源基因的特定DNA序列為檢測(cè)對(duì)象的檢測(cè)技術(shù)，第2類以導(dǎo)入外源基因表達(dá)的蛋白質(zhì)為對(duì)象的鑒定方法[3]。由于基于外源基因的檢測(cè)方法具有簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，成為轉(zhuǎn)基因作物檢測(cè)的常用技術(shù)，

收稿日期：2011-06-27

基金項(xiàng)目：農(nóng)業(yè)部轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)(2008ZX08012-005)

包括常規(guī)PCR、巢式和半巢式PCR、RT-PCR(reversetranscription PCR)、PCR-ELISA技術(shù)等。Dietrich等[4]針對(duì)轉(zhuǎn)基因水稻中的轉(zhuǎn)基因成分，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法進(jìn)行了檢測(cè)，，檢測(cè)靈敏度為0.1%。陳茹等[5]利用PCR-ELISA技術(shù)建立了檢測(cè)轉(zhuǎn)基因水稻的體系，比常規(guī)電泳檢測(cè)可提高敏感性達(dá)1000倍。這些方法雖然對(duì)結(jié)果有更加準(zhǔn)確的把握，但是操作過(guò)程復(fù)雜，檢測(cè)成本較高，對(duì)操作人員要求較高。

多重PCR是指在一次PCR反應(yīng)中同時(shí)加入多對(duì)引物，同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)目的基因，只需要一次PCR反應(yīng)，就能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶標(biāo)基因，比傳統(tǒng)PCR方法節(jié)約時(shí)間，減少費(fèi)用，目前這項(xiàng)技術(shù)在動(dòng)物病毒性傳染病和人類疾病監(jiān)測(cè)中應(yīng)用較多。

作者簡(jiǎn)介：魏霜(1988—)，男，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称钒踩�。E-mail：weishuang2008@*(16—)E-mail：

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