本文關(guān)鍵詞：綿羊肺炎支原體hlyA基因的表達(dá)及活性初步鑒定

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【摘要】：綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可引起綿羊(Ovis aries)及山羊(Capra hircus)的支原體性肺炎,分布廣泛,危害嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)在課題組前期完成MO Y98株基因組測(cè)序的基礎(chǔ)上,通過(guò)基因注釋、PCR等獲得了該菌株可能的溶血素(hemolysin,hly A)基因;依據(jù)大腸桿菌(Escherichia coli)優(yōu)勢(shì)密碼子對(duì)hly A基因進(jìn)行優(yōu)化,構(gòu)建優(yōu)化后hly A原核表達(dá)質(zhì)粒p ET32a-hly A;將該質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21(DE3)p Lys S中,獲得了相應(yīng)的重組菌株,并對(duì)重組菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá);采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot對(duì)表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行鑒定,并經(jīng)Ni2+金屬螯合柱純化�？寺×薓O hly A基因序列(Gen Bank登錄號(hào):KT598390),片段大小為375 bp,編碼125個(gè)氨基酸。優(yōu)化后密碼子適應(yīng)指數(shù)為0.91,目的基因適于在大腸桿菌中表達(dá)。重組融合蛋白多以包涵體的形式存在,其相對(duì)分子質(zhì)量約為31.6 k D,與預(yù)期大小一致。Western blot結(jié)果顯示,上清中純化出的目的蛋白能與一抗發(fā)生反應(yīng),重組蛋白特異性較好。溶血實(shí)驗(yàn)表明,當(dāng)純化后蛋白濃度稀釋到0.125μg/m L時(shí),溶解紅細(xì)胞的能力已經(jīng)下降。該研究結(jié)果為后續(xù)綿羊肺炎支原體致病性研究提供了基礎(chǔ)資料。
【作者單位】： 寧夏大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院/西部特色生物資源保護(hù)與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 綿羊肺炎支原體(MO) 溶血素(hlyA) 密碼子優(yōu)化 溶血活性
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.31460660;No.31460039和No.31260035)
【分類號(hào)】：S858.26
【正文快照】： 綿羊肺炎支原體(Mycoplasma ovipneumoniae,MO)可以引起綿羊(Ovis aries)傳染性胸膜肺炎(con-tagious ovine pleuropneumonia),1~3月齡的羔羊極易感染,也可以感染山羊(Capra hircus);主要表現(xiàn)為高熱、喘氣、咳嗽、貧血、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩、漸進(jìn)性消瘦和肺間質(zhì)增生等臨床特征(馬春

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本文編號(hào)：773496